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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关蛋白
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janet0313

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关蛋白

为什么我做的蛋白在浓缩过程中会出现沉淀，怎样防止沉淀的生成？
我做的蛋白还要做其他实验，是不是要PH值在蛋白等电点以外就可以防止沉淀生成？
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1楼2010-12-28 10:57:53
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
janet0313(金币+1): 2010-12-29 13:28:18
引用回帖:
Originally posted by janet0313 at 2010-12-28 17:13:21:


等电点怎么测啊？分子量25KDa 缓冲溶液是Tris，或HEPES

。。。。。。起码也加一点盐吧，离子强度也太低了点，少说也加个50mM的NaCl啊。我建议你在Tris或者HEPES里加 100mMNaCl，这样来纯化你的蛋白。

另外要用软件预测一下你的蛋白的等电点，然后再选pH。

你用什么方法浓缩的呢？超滤？

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-28 at 17:40 ]
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7楼2010-12-28 17:38:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:09:17
janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:13:34
将你的蛋白质的等电点，分子量大小及缓冲液组成成分列出来看看。
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2楼2010-12-28 11:13:51
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laoshu16

银虫 (小有名气)
janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:09:22
引用回帖:
Originally posted by janet0313 at 2010-12-28 10:57:53:
为什么我做的蛋白在浓缩过程中会出现沉淀，怎样防止沉淀的生成？
我做的蛋白还要做其他实验，是不是要PH值在蛋白等电点以外就可以防止沉淀生成？

高浓度的蛋白本来就很容易沉淀出来了吧
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3楼2010-12-28 11:45:56
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janet0313

银虫 (小有名气)
等电点怎么测啊，我还不太清楚？
蛋白分子量25KDa，用的缓冲溶液时HEPES
该怎么办啊？
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4楼2010-12-28 17:11:12
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