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emmayun

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】提取植物叶中的蛋白怎样做呀

我想提一个植物的叶中的蛋白，怎么做呀？
谁知到提供个方法呀。

[ Last edited by lovibond on 2011-11-25 at 13:37 ]

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1楼 2010-12-27 11:32:21

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zhuxingjie

金虫 (小有名气)

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★
lovibond(金币+1):鼓励交流 2010-12-28 09:33:41
emmayun(金币+1):20 2010-12-28 15:51:04

三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：
提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！