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emmayun

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助】提取植物叶中的蛋白怎样做呀

我想提一个植物的叶中的蛋白,怎么做呀?
谁知到提供个方法呀。

[ Last edited by lovibond on 2011-11-25 at 13:37 ]
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zhuxingjie

金虫 (小有名气)



lovibond(金币+1):鼓励交流 2010-12-28 09:33:41
emmayun(金币+1):20 2010-12-28 15:51:04
三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
药品:
提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
3楼2010-12-28 08:59:02
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hzau_hb

金虫 (小有名气)



lovibond(金币+1):鼓励交流 2010-12-28 09:33:50
像这样的资料很多啊,比如碱提酸沉,水提醇沉等等
2楼2010-12-28 08:50:38
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