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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何测定某一蛋白在不同组织的表达量？
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何测定某一蛋白在不同组织的表达量？

现在已经知道mRNA序列，请问如何得到每个组织表达量的多少？看哪个组织多，哪个组织少
请问都有什么方法，？什么方法做起来最容易
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1楼2010-12-21 13:37:39
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yorkham

铜虫 (小有名气)
★
tongxinkxy(金币+1):1 2010-12-21 13:57:18
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 14:36:03
tongxinkxy(金币+1): 2011-04-26 08:11:10
一种是用实时荧光定量PCR，这个方法很普遍，也省钱容易操作，多为定量
另一种就是Northern Blotting, 需要设计探针，进行杂交，步骤多些，多为定性定位
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3楼2010-12-21 13:52:53
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 14:35:57
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-21 13:37:39:
现在已经知道mRNA序列，请问如何得到每个组织表达量的多少？看哪个组织多，哪个组织少
请问都有什么方法，？什么方法做起来最容易

最直观的方法是 Northern

最简单的方法是：RT-PCR
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2楼2010-12-21 13:47:58
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yorkham at 2010-12-21 13:52:53:
一种是用实时荧光定量PCR，这个方法很普遍，也省钱容易操作，多为定量
另一种就是Northern Blotting, 需要设计探针，进行杂交，步骤多些，多为定性定位

定量和定性定位区别在哪里呢？

这两种方法大概花费都需要多少呢？
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4楼2010-12-21 13:58:07
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yorkham

铜虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 14:36:12
荧光定量结果是统计图，有绝对定量和相对定量，绝对定量需要标线，最后表达量是以mRNA 的Copy数表示，相对对量是以内参为标准，表达量以目的基因与内参的比值表示
Northern 的结果是以放射自显影的强度表示
具体多少钱不好算，Real time的荧光染料现在都比较便宜，我们一般用这个，呵呵
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5楼2010-12-21 14:19:57
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