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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】细菌生长曲线的绘制

斜面菌株划平板37°,24h活化后挑取单菌落于2ml液体培养基中,200rpm/min 37°过夜(12-18h)培养,得到的菌液作为菌种。取1ml菌种加入到100ml液体培养基中混合均匀,分装到13个试管中,200rpm/min 37°培养,每隔1h取一管之后测定每管的600nm下的吸光值绘制时间与OD值之间的曲线。请问我的接种量为1%,但是有些实验书上是2%或者4%,接种量应该控制在多少?另外摇床的转速应该是多少才正确?应为不同的接种量和转速对OD值都有影响。然后我将每个管子都做了平板计数,但是长出的菌落有两种,一种大的,一种小的,请高手指点一下,谢谢
第一个图是1h的平板计数,第二个图示8h的平板计数,都做了3个平行,但是张的情况都菌落是有大有小。




[ Last edited by lilirong2009 on 2010-12-20 at 20:25 ]
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two

金虫 (正式写手)



amisking(金币+1):鼓励发帖交流! 2010-12-20 20:53:55
第一有杂菌
第二不同步
2楼2010-12-20 20:39:36
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


你说的不同步指的啥?麻烦描述清楚些
3楼2010-12-21 12:56:02
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rioarsenal

金虫 (正式写手)



rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:31:23
接种量应该由菌的生长速度和培养时间决定,目的是能保证培养物在最适条件下生长。而且体积也不能说明问题,因为涉及到浓度问题,应该具体到接入多少个活菌,才精确。
4楼2010-12-21 13:19:18
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zhy_seven

铁虫 (初入文坛)



rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:31:30
我们实验室大肠杆菌的接种量是2%,培养15个小时大概
5楼2010-12-21 14:00:01
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 13:19:18:
接种量应该由菌的生长速度和培养时间决定,目的是能保证培养物在最适条件下生长。而且体积也不能说明问题,因为涉及到浓度问题,应该具体到接入多少个活菌,才精确。

你的接多少个活菌做法过于苛刻,估计没有那样做的,也难做到
6楼2010-12-21 19:35:29
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eagles123

金虫 (正式写手)


lilirong2009(金币+1): 2010-12-21 21:17:30
你那样做好像有点复杂。。。 我们一般是 一个菌落接种到50ml液体培养基,过夜,接种然后100ul到25ml培养基, 然后每隔一段时间测OD 同时做viable count。基本就能保持同步了
7楼2010-12-21 21:06:27
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by eagles123 at 2010-12-21 21:06:27:
你那样做好像有点复杂。。。 我们一般是 一个菌落接种到50ml液体培养基,过夜,接种然后100ul到25ml培养基, 然后每隔一段时间测OD 同时做viable count。基本就能保持同步了

你们的接种量好少哦,我也有做你说的定期从三角瓶里面取样测定OD值的,可是那样感觉容易污染,我就没那样做。
8楼2010-12-21 21:19:35
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eagles123

金虫 (正式写手)



silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-22 12:17:36
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-12-21 21:19:35:


你们的接种量好少哦,我也有做你说的定期从三角瓶里面取样测定OD值的,可是那样感觉容易污染,我就没那样做。

量还好吧, 普通的菌 一般5个小时能到stationary phase。 至于污染我这样做还从来没被污染过。。 不知道你们实验室有没有过滤通风设备
9楼2010-12-21 22:05:20
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-12-21 19:35:29:



你的接多少个活菌做法过于苛刻,估计没有那样做的,也难做到

可以用血球计数板粗略估算一下啊,呵呵,挺简单的。

如果你是在拿不准,做一下还是可以的
10楼2010-12-21 22:12:33
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊,呵呵,挺简单的。

如果你是在拿不准,做一下还是可以的

雪球计数死活一起算,还是不准确
11楼2010-12-21 22:19:57
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by eagles123 at 2010-12-21 22:05:20:


量还好吧, 普通的菌 一般5个小时能到stationary phase。 至于污染我这样做还从来没被污染过。。 不知道你们实验室有没有过滤通风设备

我们是在普通实验室做的,没有过滤通风设备,所以无法无菌操作取样
12楼2010-12-21 22:22:21
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jzhe961

木虫 (正式写手)


呵呵,生长曲线并不需要严格控制接种量,同步化是必需的。
13楼2010-12-22 00:03:02
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媛媛yang

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊,呵呵,挺简单的。

如果你是在拿不准,做一下还是可以的

血球计数板看得到细菌?用油镜看的话,就看不到格了吧
14楼2010-12-25 11:14:11
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tlm305

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊,呵呵,挺简单的。

如果你是在拿不准,做一下还是可以的

血球板计数器只能用来看孢子呢,要是他的菌都长成大的菌丝神马的,就不好看了
15楼2010-12-29 09:47:38
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371147760

木虫 (著名写手)



rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:32:14
第一个图可能是平板培养时间太长导师菌落过大,也有可能是杂菌污染了。
绘制生长曲线没有必要平板计数,用紫外测定OD值就好,平板计数绘制的生长曲线那可真叫曲线(我也做过,呵呵)
16楼2011-01-20 16:09:26
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jinbu001

新虫 (初入文坛)


第一个稀释倍数不太够吧。。第二个明显涂布不均
17楼2011-01-23 12:16:07
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tianhome

木虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主做的是重组大肠杆菌吗?如果是,可能是你培养时间太长了?
18楼2013-09-18 02:57:02
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