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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌生长曲线的绘制
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌生长曲线的绘制

斜面菌株划平板37°，24h活化后挑取单菌落于2ml液体培养基中，200rpm/min 37°过夜（12-18h）培养，得到的菌液作为菌种。取1ml菌种加入到100ml液体培养基中混合均匀，分装到13个试管中，200rpm/min 37°培养，每隔1h取一管之后测定每管的600nm下的吸光值绘制时间与OD值之间的曲线。请问我的接种量为1%，但是有些实验书上是2%或者4%，接种量应该控制在多少？另外摇床的转速应该是多少才正确？应为不同的接种量和转速对OD值都有影响。然后我将每个管子都做了平板计数，但是长出的菌落有两种，一种大的，一种小的，请高手指点一下，谢谢
第一个图是1h的平板计数，第二个图示8h的平板计数，都做了3个平行，但是张的情况都菌落是有大有小。




[ Last edited by lilirong2009 on 2010-12-20 at 20:25 ]
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1楼 2010-12-20 20:15:44
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two

金虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1):鼓励发帖交流！ 2010-12-20 20:53:55
第一有杂菌
第二不同步
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2楼2010-12-20 20:39:36
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
你说的不同步指的啥？麻烦描述清楚些
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3楼2010-12-21 12:56:02
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:31:23
接种量应该由菌的生长速度和培养时间决定，目的是能保证培养物在最适条件下生长。而且体积也不能说明问题，因为涉及到浓度问题，应该具体到接入多少个活菌，才精确。
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4楼2010-12-21 13:19:18
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zhy_seven

铁虫 (初入文坛)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:31:30
我们实验室大肠杆菌的接种量是2%，培养15个小时大概
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5楼2010-12-21 14:00:01
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 13:19:18:
接种量应该由菌的生长速度和培养时间决定，目的是能保证培养物在最适条件下生长。而且体积也不能说明问题，因为涉及到浓度问题，应该具体到接入多少个活菌，才精确。

你的接多少个活菌做法过于苛刻，估计没有那样做的，也难做到
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6楼2010-12-21 19:35:29
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eagles123

金虫 (正式写手)
lilirong2009(金币+1): 2010-12-21 21:17:30
你那样做好像有点复杂。。。 我们一般是 一个菌落接种到50ml液体培养基，过夜，接种然后100ul到25ml培养基， 然后每隔一段时间测OD 同时做viable count。基本就能保持同步了
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7楼2010-12-21 21:06:27
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by eagles123 at 2010-12-21 21:06:27:
你那样做好像有点复杂。。。 我们一般是 一个菌落接种到50ml液体培养基，过夜，接种然后100ul到25ml培养基， 然后每隔一段时间测OD 同时做viable count。基本就能保持同步了

你们的接种量好少哦，我也有做你说的定期从三角瓶里面取样测定OD值的，可是那样感觉容易污染，我就没那样做。
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8楼2010-12-21 21:19:35
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eagles123

金虫 (正式写手)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-22 12:17:36
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-12-21 21:19:35:


你们的接种量好少哦，我也有做你说的定期从三角瓶里面取样测定OD值的，可是那样感觉容易污染，我就没那样做。

量还好吧， 普通的菌 一般5个小时能到stationary phase。 至于污染我这样做还从来没被污染过。。 不知道你们实验室有没有过滤通风设备
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9楼2010-12-21 22:05:20
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-12-21 19:35:29:



你的接多少个活菌做法过于苛刻，估计没有那样做的，也难做到

可以用血球计数板粗略估算一下啊，呵呵，挺简单的。

如果你是在拿不准，做一下还是可以的
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10楼2010-12-21 22:12:33
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊，呵呵，挺简单的。

如果你是在拿不准，做一下还是可以的

雪球计数死活一起算，还是不准确
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11楼2010-12-21 22:19:57
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by eagles123 at 2010-12-21 22:05:20:


量还好吧， 普通的菌 一般5个小时能到stationary phase。 至于污染我这样做还从来没被污染过。。 不知道你们实验室有没有过滤通风设备

我们是在普通实验室做的，没有过滤通风设备，所以无法无菌操作取样
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12楼2010-12-21 22:22:21
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jzhe961

木虫 (正式写手)
呵呵，生长曲线并不需要严格控制接种量，同步化是必需的。
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13楼2010-12-22 00:03:02
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媛媛yang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊，呵呵，挺简单的。

如果你是在拿不准，做一下还是可以的

血球计数板看得到细菌？用油镜看的话，就看不到格了吧
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14楼2010-12-25 11:14:11
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tlm305

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:12:33:


可以用血球计数板粗略估算一下啊，呵呵，挺简单的。

如果你是在拿不准，做一下还是可以的

血球板计数器只能用来看孢子呢，要是他的菌都长成大的菌丝神马的，就不好看了
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15楼2010-12-29 09:47:38
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371147760

木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:32:14
第一个图可能是平板培养时间太长导师菌落过大，也有可能是杂菌污染了。
绘制生长曲线没有必要平板计数，用紫外测定OD值就好，平板计数绘制的生长曲线那可真叫曲线（我也做过，呵呵）
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16楼2011-01-20 16:09:26
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jinbu001

新虫 (初入文坛)
第一个稀释倍数不太够吧。。第二个明显涂布不均
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17楼2011-01-23 12:16:07
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tianhome

木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主做的是重组大肠杆菌吗？如果是，可能是你培养时间太长了？
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18楼2013-09-18 02:57:02
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