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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反敲除
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】反敲除

请问FRT位点都是一样的吗？我对我敲除后的菌进行测序发现FRT位点处有一个突变 会不会对反敲除有影响呐 谢谢
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1楼 2010-12-16 20:27:46
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
wwdxx2004(金币+1): 2010-12-17 20:57:23
scelab(金币+3):谢谢交流！:tiger06: 2010-12-17 23:15:56
1楼说的有可能，测序出来结果误差的可能性还是很大的，因为对于Flp/FRT系统，具有良好的稳定性，你的“反敲除”只是一个pCP20的转化热击表达消除抗性基因片段的过程，不麻烦的，如果真的是FRT位点的一个突变，即使抗性基因消除以后，FRT还是会留在序列上，对后期的发酵有没有影响还是不好说的。呵呵~~希望是测序的问题
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7楼2010-12-17 10:06:27
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susizheng

木虫 (著名写手)
会不会是测序的误差，先反敲除着看看。
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2楼2010-12-16 21:25:22
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-12-16 20:27:46:
请问FRT位点都是一样的吗？我对我敲除后的菌进行测序发现FRT位点处有一个突变 会不会对反敲除有影响呐 谢谢

什么叫 反敲除
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3楼2010-12-16 21:44:29
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
wwdxx2004(金币+1): 2010-12-17 20:54:13
dhd997(金币+1):good 2010-12-18 13:53:13
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-16 21:44:29:

什么叫 反敲除

反敲除，就是转入抗性片段敲除基因后，转入pCP20表达FLP重组酶，利用抗性片段两端的FRT序列将抗性标记删除。
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4楼2010-12-17 09:19:24
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