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[交流]
【求助/交流】dUTP UNG/UDG法抑制污染的具体方法
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最近实验室污染严重，简单的防止污染的方法基本没用了，看到有dUTP UNG/UDG法抑制污染，但都写的不清楚，所以有几点想请教下做过的朋友，还望赐教！谢谢！ 1. 在已经出现污染的情况下，加入dUTP是否可以抑制污染，看到有说直接按比较加入dUTP就可以抑制污染，那原来存在的产物污染是不是也能被dUTP识别呢？ 2. 类似问题1,在已经存在污染的条件下，使用该方法是否能完全抑制污染呢？UNG/UDG对无dUTP的链是无效的，那原来的污染是否会不再产生影响呢？ |
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7楼2011-04-21 15:40:06
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
傻子(金币+2):谢谢指点 2010-12-15 12:36:39
dhd997(金币+2):依旧很热心，鼓励 2010-12-15 15:38:18
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dhd997(金币+2):依旧很热心，鼓励 2010-12-15 15:38:18
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这个方法的原理是使用dUTP替代dNTP，在非PCR条件下，比如在混PCR体系的时候，一些非特异扩增如果进行，就会引入dUTP。然后在正式上PCR机器的时候，第一步反应是50℃孵育，让UDG酶充分反应，去掉那些非特异扩增。然后预变性94度的时候，就把UDG酶失活了 像你说的污染，应该是实验室洁净度的问题了……解决方法很简单。台面、枪什么的擦干净，用酒精再擦一次。然后照紫外，半小时就够了。枪头高压灭菌。 还有就是你的试剂是不是污染了……污染了就换新的吧 |
2楼2010-12-15 12:22:09
3楼2011-04-21 09:42:40
4楼2011-04-21 12:12:26