24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

傻子

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2605.7
帖子: 619
在线: 212.3小时
虫号: 339910

UDG法抑制污染的具体方法

最近实验室污染严重，简单的防止污染的方法基本没用了，看到有dUTP UNG/UDG法抑制污染，但都写的不清楚，所以有几点想请教下做过的朋友，还望赐教！谢谢！

1. 在已经出现污染的情况下，加入dUTP是否可以抑制污染，看到有说直接按比较加入dUTP就可以抑制污染，那原来存在的产物污染是不是也能被dUTP识别呢？

2. 类似问题1,在已经存在污染的条件下，使用该方法是否能完全抑制污染呢？UNG/UDG对无dUTP的链是无效的，那原来的污染是否会不再产生影响呢？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-12-15 10:54:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

MolEPI: 4
应助: 107 (高中生)
金币: 3442.4
帖子: 1478
在线: 266.1小时
虫号: 512865

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-04-21 14:35:23:
因为DNA要T啊，U是不行的……

就是说把整个序列的T都换成U了。如果不行的话，那为什么用dUTP去防止污染？对后面的步骤都没影响？
还是只是在前面的步骤中加入，灭活后再用正常的PCR体系去扩？
啊，不懂啊怎么办啊！

赞一下(1人)

回复此楼

7楼2011-04-21 15:40:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 11 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
傻子(金币+2):谢谢指点 2010-12-15 12:36:39
dhd997(金币+2):依旧很热心，鼓励 2010-12-15 15:38:18

这个方法的原理是使用dUTP替代dNTP，在非PCR条件下，比如在混PCR体系的时候，一些非特异扩增如果进行，就会引入dUTP。然后在正式上PCR机器的时候，第一步反应是50℃孵育，让UDG酶充分反应，去掉那些非特异扩增。然后预变性94度的时候，就把UDG酶失活了

像你说的污染，应该是实验室洁净度的问题了……解决方法很简单。台面、枪什么的擦干净，用酒精再擦一次。然后照紫外，半小时就够了。枪头高压灭菌。

还有就是你的试剂是不是污染了……污染了就换新的吧

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2010-12-15 12:22:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

MolEPI: 4
应助: 107 (高中生)
金币: 3442.4
帖子: 1478
在线: 266.1小时
虫号: 512865

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 可以直接pm 2011-04-21 10:07:23

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-15 12:22:09:
这个方法的原理是使用dUTP替代dNTP，在非PCR条件下，比如在混PCR体系的时候，一些非特异扩增如果进行，就会引入dUTP。然后在正式上PCR机器的时候，第一步反应是50℃孵育，让UDG酶充分反应，去掉那些非特异扩增。然 ...

我想问一下啊，我们用dUTP代替了dNTP，对后面的连接和转化有没有影响？最近我们做的克隆都是阴性，郁闷

赞一下(2人)

回复此楼

3楼2011-04-21 09:42:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖