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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dingjunrong

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】粪便DNA提取的问题

本人要提取不同人粪便中的细菌总DNA,后面要用于定量,称取的是100mg冷冻的粪便,然后按照试剂盒步骤提取的,步骤中有一步是吸取250mL上清,做下一步的提取,因为我要做定量,是不是所有的上清我都要取,然后提取里面的DNA呀,因为做到这一步时,不是所有的样品的上清都一样多的,然后后面的步骤中所添加的提取试剂是不是要按比例增加呢??望有经验的人指点,谢谢了!!
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bigboy123

铜虫 (小有名气)



rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-14 14:33:55
dingjunrong(金币+1): 2010-12-14 17:06:57
控制一下你悬浮液的体积就可以了,
一般按照说明书要求加250ul 上清基本就够用了,剩下的可以备用。
2楼2010-12-14 13:15:59
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dingjunrong

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by bigboy123 at 2010-12-14 13:15:59:
控制一下你悬浮液的体积就可以了,
一般按照说明书要求加250ul 上清基本就够用了,剩下的可以备用。

可是我后面要通过PCR手段对不同粪便样品中的菌定量的,如果全部都取250ul的话,跟原来称取的粪便的重量就无法联系起来了,而且不同的样品经过多步处理离心后的上清液的体积是不同的,为了定量,是不是要取全部的比较好呀??谢谢!
3楼2010-12-14 16:43:33
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bigboy123

铜虫 (小有名气)


dingjunrong(金币+2): 2010-12-15 08:39:50
呵呵,只要不是差数量级就可以了。PCR的定量也不是准确定量,准确率的波动范围也在10倍左右,同一DNA样本重复做也会有这个波动的。所以你取50ul和250ul所测量的结果其Ct值应该差距不大。
如果你要特别准确,可以固定粪便质量,然后把所有上清都裂解处理,然后分几次加到柱子里。
4楼2010-12-14 20:41:52
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qingshi2

银虫 (小有名气)


有专门的粪便DNA提取试剂盒
5楼2011-01-05 20:40:18
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王津

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
您好,我也用的这个试剂盒提取的粪便DNA,但是我直接跑胶为什么没有条带,你直接跑胶有条带吗?用的多大的DNAmarker。我用的5000bp是不是太小了。
6楼2012-09-12 14:31:06
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nodong

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 王津 at 2012-09-12 14:31:06
您好,我也用的这个试剂盒提取的粪便DNA,但是我直接跑胶为什么没有条带,你直接跑胶有条带吗?用的多大的DNAmarker。我用的5000bp是不是太小了。

23kb的mark
7楼2014-03-25 15:35:30
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cxkhhh

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我用粪便dna提取试剂盒提的,按照说明步骤操作,一切都挺顺利的
8楼2018-11-09 08:52:16
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