| 查看: 2457 | 回复: 18 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】建个连接体系
|
|||
|
本人最近在做连接实验，在做此次连接之前的连接与酶切做的都很顺利，但这次按照常规建立的体系，尝试了几次都没有连上，请教虫友帮忙建个体系。 目的片段440bp左右，回收定量20ng/μl 载体大小6993bp，回收定量50ng/μl 真诚请教各位虫友，小弟不胜感激！（连接所用酶等均没有问题） 我开始没有用T4,用的是Takara的试剂盒里带的SolutionⅠ（该Mix是buffer和T4的混合物，2×），10μl的体系，目的用了2.5μl，载体用了2μl，SolutionⅠ4.5μl；又用了一次Promega的T4，也是10μl体系，目的与载体的量不变，T4 0.5μl，buffer 1μl，仍然没连上！晕倒！ [ Last edited by yrr032 on 2010-12-18 at 12:15 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有293人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 液相色谱仪挪了个位置，现在工作站与仪器之间无法建立连接？？
已经有5人回复
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
- 连接体系的确定
已经有19人回复
- 请问：SCLAE S=2，对于三维体系，意思是建一个2*2*2的超晶胞吗？
已经有9人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【讨论】企业为什么要建立培训体系
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
安徽农业大学李亚辉教授招收 化学、农药学、植保类2026级博士研究生
+3/105
-
湖北文理学院，材料，化学，环境，机械，电子，工程等专业均可报名调剂！
+3/101
-
供应有机合成一整套设备，有机合成实验室常用产品。
+1/90
-
长江大学化工学院【0857资源与环境】招理学、工学调剂生！
+1/86
-
长江大学化工学院环境学硕、专硕最后一批调剂（理学、工学均可）
+1/83
-
中山大学招聘博士后（化学生物学、蛋白质组学、环境毒理学）
+1/78
-
致中山白雪：于法理与人间，赴一场双向奔赴
+1/31
-
天津理工大学功能晶体研究院（晶体材料全国重点实验室）杰青团队招收2026年博士研究生
+1/22
-
一本院校，化学、环境工程，上车就走
+1/18
-
山东大学集成电路学院招博士了
+1/14
-
大连大学-贵州省煤炭洁净利用重点实验室联合培养研究生 化学5人+环境工程7人
+1/10
-
南华大学资源环境专硕和环境科学与工程学硕有调剂名额
+1/9
-
香港科技大学（广州）杨其纯课题组招收水文学方向博士后研究人员两名
+1/8
-
重庆三峡科技大学电磁场与微波技术专业接收调剂，考数二可调，系统4月13日开放
+1/8
-
大连大学-贵州省煤炭洁净利用重点实验室联合培养研究生 化学5人+环境工程7人
+1/7
-
延安大学化学与化工学院接收化学专业调剂生，4月11日下午复试（工科、理学均可调剂）
+5/5
-
26申博，ai+材料方向，求课题组推荐
+1/3
-
西安工程大学环境与化学工程学院学硕调剂（专硕可调学硕）
+1/3
-
山西大学招收2026级申请考核制化学材料类博士研究生一名
+1/1
-
安徽工程大学化学与环境工程学院2026级硕士研究生还有部分调剂名额-资源与环境专硕
+1/1
7楼2010-12-16 13:35:35
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-15 17:25:06
yrr032(金币+1): 2010-12-18 11:58:18
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-15 17:25:06
yrr032(金币+1): 2010-12-18 11:58:18
| 从数据来看，你的载体浓度相对于目的基因来说比较低，加上你是用一个如此大的载体和如此小的目的基因进行连接，比较困难。我最近连接了一个7K加800bp的，前两次也是不行，第三次重新制备了一些载体，浓度提高了一些，最后连接成功了。我用的是20μl体系（1μl T4 ligase，2μl buffer，剩余的17μl除了载体就是目的基因，你根据自己的浓度来定二者的比例，建议载体多加一些，毕竟浓度比较低）。祝实验顺利…… |
2楼2010-12-15 15:57:15
3楼2010-12-15 18:08:59
4楼2010-12-16 09:03:45
