| 查看: 2456 | 回复: 18 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】建个连接体系
|
|||
|
本人最近在做连接实验，在做此次连接之前的连接与酶切做的都很顺利，但这次按照常规建立的体系，尝试了几次都没有连上，请教虫友帮忙建个体系。 目的片段440bp左右，回收定量20ng/μl 载体大小6993bp，回收定量50ng/μl 真诚请教各位虫友，小弟不胜感激！（连接所用酶等均没有问题） 我开始没有用T4,用的是Takara的试剂盒里带的SolutionⅠ（该Mix是buffer和T4的混合物，2×），10μl的体系，目的用了2.5μl，载体用了2μl，SolutionⅠ4.5μl；又用了一次Promega的T4，也是10μl体系，目的与载体的量不变，T4 0.5μl，buffer 1μl，仍然没连上！晕倒！ [ Last edited by yrr032 on 2010-12-18 at 12:15 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有74人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 液相色谱仪挪了个位置，现在工作站与仪器之间无法建立连接？？
已经有5人回复
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
- 连接体系的确定
已经有19人回复
- 请问：SCLAE S=2，对于三维体系，意思是建一个2*2*2的超晶胞吗？
已经有9人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【讨论】企业为什么要建立培训体系
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
国家“千人计划”青年项目获得者团队最后2人07、08等学科研究生调剂
+1/284
-
安徽农业大学李亚辉教授招收 化学、农药学、植保类2026级博士研究生
+3/192
-
寻找真诚的女朋友，坐标北京，88男
+1/159
-
新加坡国立大学化学系刘小钢教授课题组招收博士生3-4名
+1/90
-
接收材料科学与工程和化学专业学硕调剂-西南科大辐射防护材料
+3/74
-
生物与医药（生物技术与工程领域）调剂还剩最后一小时，请抓紧时间，
+1/41
-
上海海事大学博导招26级全日制管理学博士
+1/38
-
中新绿色科技研究院（山东济南）招收机械设计方向实习生
+1/37
-
西交利物浦大学黄彪院士招收26年全奖博士生1名（工业系统数字孪生方向）
+1/34
-
复试调剂-招收调剂生（一志愿07开头专业），海洋生物专业4个名额
+1/10
-
新出名额：欢迎药学、生物、人工智能、计算机等有班长团支书经历加入-上海
+1/9
-
★上海★上海工程技术大学·环境与资源创新中心（ICER）接收化工材料环境等学科调剂生
+1/8
-
延安大学化学与化工学院接收调剂生（化学、化工学硕和材料与化工专硕）
+5/5
-
延安大学化学与化工学院接收调剂生，4月12日下午线上复试（化学、化工学硕）
+5/5
-
江西水利电力大学市政工程接受调剂
+1/4
-
福建理工大学学硕08开头还有调剂名额
+1/3
-
招收化学、海洋科学、材料、环境专业调剂
+3/1
-
长江师范学院 材料工程 招收调剂学生
+1/1
-
安徽工程大学化学与环境工程学院2026级硕士研究生还有部分调剂名额-资源与环境专硕
+1/1
-
招收0703开头的学硕调剂生 线上复试
+1/1
7楼2010-12-16 13:35:35
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-15 17:25:06
yrr032(金币+1): 2010-12-18 11:58:18
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-15 17:25:06
yrr032(金币+1): 2010-12-18 11:58:18
| 从数据来看，你的载体浓度相对于目的基因来说比较低，加上你是用一个如此大的载体和如此小的目的基因进行连接，比较困难。我最近连接了一个7K加800bp的，前两次也是不行，第三次重新制备了一些载体，浓度提高了一些，最后连接成功了。我用的是20μl体系（1μl T4 ligase，2μl buffer，剩余的17μl除了载体就是目的基因，你根据自己的浓度来定二者的比例，建议载体多加一些，毕竟浓度比较低）。祝实验顺利…… |
2楼2010-12-15 15:57:15
3楼2010-12-15 18:08:59
4楼2010-12-16 09:03:45
