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swq0021

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA溶液去盐，急急！！

我的DNA样品溶液含有20 mM的Tris 和0.5 M的NaCl，现在想把盐除去，纯化DNA，请问下各位有什么好的办法吗？？
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1楼 2010-12-04 10:46:27
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adslye

银虫 (正式写手)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by swq0021 at 2010-12-04 10:46:27:
我的DNA样品溶液含有20 mM的Tris 和0.5 M的NaCl，现在想把盐除去，纯化DNA，请问下各位有什么好的办法吗？？

重新乙醇沉淀，再用70醇洗洗就好。
或者，过下柱子。就是胶回收或者提质粒kit中的柱子。
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2楼2010-12-04 14:09:47
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nkk12345

木虫 (小有名气)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
乙醇沉淀就好了
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3楼2010-12-04 14:47:43
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
照片文章看看
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4楼2010-12-04 14:54:41
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
swq0021(金币+1): 2010-12-04 16:06:50
醇沉淀，或者超滤管。当然，后者要简单迅速。
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5楼2010-12-04 14:58:29
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swq0021

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-04 14:58:29:
醇沉淀，或者超滤管。当然，后者要简单迅速。

谢谢你，超滤管用多大的呢，具体怎么做说一下好吗，
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6楼2010-12-04 16:06:34
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-05 08:45:04
引用回帖:
Originally posted by swq0021 at 2010-12-04 16:06:34:

谢谢你，超滤管用多大的呢，具体怎么做说一下好吗，

看你的DNA具体是多大的片段。一般超滤管的截留量有3,10kDa或者更大的。

如果你的DNA片段太小，那么采用这个办法就不是很好了。

如果你用3kDa的超滤管的话，你的DNA至少应该是6kDa。你的DNA的分子量可以用DNAman等软件计算一下。
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7楼2010-12-04 16:09:50
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
swq0021(金币+1): 2010-12-04 17:03:56
dhd997(金币+1):热心鼓励 2010-12-05 08:45:34
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-04 16:09:50:



看你的DNA具体是多大的片段。一般超滤管的截留量有3,10kDa或者更大的。

如果你的DNA片段太小，那么采用这个办法就不是很好了。

如果你用3kDa的超滤管的话，你的DNA至少应该是6kDa。你的DNA的分子量可 ...

至于用超滤管去盐，那就很简单了。将你的DNA载入，离心（转速按照说明书，一般不高于5000rpm）至很小的一个体积。然后就加TE至最大体积，这样重复三次就可以脱盐了。
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8楼2010-12-04 16:11:46
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swq0021

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-04 16:11:46:



至于用超滤管去盐，那就很简单了。将你的DNA载入，离心（转速按照说明书，一般不高于5000rpm）至很小的一个体积。然后就加TE至最大体积，这样重复三次就可以脱盐了。

谢谢你！意思是说离心后，盐下去了，留在上面的是DNA吗，我的DNA分子量大概在20000左右
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9楼2010-12-04 16:25:57
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by swq0021 at 2010-12-04 16:25:57:


谢谢你！意思是说离心后，盐下去了，留在上面的是DNA吗，我的DNA分子量大概在20000左右

恩，是的，留在上面的是DNA，3kDa的绝对没问题，呵呵。

祝好运
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10楼2010-12-04 19:14:56
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soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
醇沉淀哦
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11楼2010-12-04 19:32:08
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fjt198719

木虫 (著名写手)
★
swq0021(金币+1):谢谢参与
咋都一样的方法呢！！！
我用的是1%的琼脂糖和0.1mol/L的葡萄糖配成的固体，溶化后，在一个EP管中加入一定量，然后在上面插一个PCR小管，待凝固后取出PCR管，将你的DNA或者质粒加入形成的小洞中，4°C保存一小时后，取出就行了。
我们就是按照上诉步骤给质粒脱盐脱离子的，大家都知道，这样利于转化，尤其难转化的菌更应该保证质粒无盐。
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12楼2010-12-04 20:00:11
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