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[交流]
【求助/交流】生物菜鸟求助基础问题：如何判断质粒是表达质粒还是克隆质粒？
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如题，最近发email向老外索要了一个质粒，pET29a-SmtA，查了一下这个质粒的来源，是在pET29a中插入了SmtA基因片段（可以表达ＭＴ蛋白）之后的质粒~ 可是质粒拿到手之后不知道如何使用啊~不知道这个质粒能否直接转化到大肠杆菌中之后，能不能让大肠杆菌合成出ＭＴ蛋白呢？ 我是学化学的，表达不专业，各位见谅，见谅～ 我的疑问有一下几方面： 1，可以从质粒名称知道这质粒是表达载体还是克隆载体吗？表达载体就是转化进宿主细胞之后就能表达出来该基因的吗？ 2，如果单看质粒名字看不出来，如何鉴别之？ 多谢各位啦~ |
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看插入位点上游的启动子是什么，有没有操纵子结构等等 像这个是pET系列的衍生质粒，那肯定是表达质粒了，要转化进表达用菌的感受态。如果要来的质粒很少的话，最好先转克隆菌，多提一点质粒以备以后用。 因为pET29表达用的是T7启动子，所以宿主菌要是T7噬菌体的溶源菌（最普通最常见的就是BL21(DE3)，感受态很容易买到）。调控元件是lac操纵子，所以要用IPTG诱导表达。 网上搜一下“pET表达手册”，应该对你很有帮助。另外去Novagen网站上找pET29的图谱信息，产品代码TB076。 找不到的话站内我你的邮箱，我可以发给你。 |
2楼2010-12-02 21:34:33
