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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组提取问题求助
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因组提取问题求助 已有2人参与

最近用CTAB法提了两轮基因组，得到的少量沉淀都是油状的，用70%乙醇洗涤时没法悬浮，用枪头触碰结果就给粘到枪头上再也下不来了。第二轮倒是有一两管勉强能悬起来，似乎没什么油性。想就此提取请教大家下面的环节是不是有问题：
1、CTAB提取缓冲液是否不应多次灭菌
2、Tris饱和的酚我是单独分取了下层置于离心管中，4度保存
3、沉淀时采用0.1倍体积的pH6.8的NaAC和两倍体积的无水乙醇，分别预冷。
4、样本为收集的干品药材，表面用酒精擦拭后彻底挥杆后液氮研磨进行后续提取
谢谢大家帮忙分析
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1楼 2010-11-10 10:29:34
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):热心的斑斑 2010-11-10 15:40:44
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-11-10 12:42:26:

那该在哪步加以改进呢

这个问题不好解决，因为不同植物的含量想差极大，影响因素也不一样，多看看文献吧，国内文献有好多这样的小文章，不行就买试剂盒吧
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4楼2010-11-10 13:34:52
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-11-10 12:29:11:
多糖干扰

那该在哪步加以改进呢
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3楼2010-11-10 12:42:26
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-11-10 13:34:52:



这个问题不好解决，因为不同植物的含量想差极大，影响因素也不一样，多看看文献吧，国内文献有好多这样的小文章，不行就买试剂盒吧

只是这次出现的情况跟以往差别挺大的，以前的沉淀虽然贴壁吹打不下，但类似粉状还是可以脱离管壁的。不过前一轮的跑了电泳，降解产物还是有的，就是影响扩增，全都是阴性结果
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5楼2010-11-10 13:43:03
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