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郝钊

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】只加Buffer的质粒都能被切碎,这是什么原因? 已有3人参与

我这两天在构建一个检测质粒,提取质粒后酶切,发现质粒被切碎了;后来只加入Buffer也能被切碎,其他的质粒作为对照就没有问题,这是怎么回事啊?
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)


郝钊(金币+1):谢谢参与
是否Buffer被酶污染了
2楼2010-11-05 09:31:45
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
郝钊(金币+1):谢谢参与
reasonspare(金币+1):好久不见了。 2010-11-05 12:00:35
Buffer被酶污染了,或被DNase污染了
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
3楼2010-11-05 11:07:21
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


郝钊(金币+1):谢谢参与
郝钊(金币+1):没错,现在只可能是这个原因了。不过会有什么问题呢? 2010-11-05 21:16:12
不排除质粒自身的原因
4楼2010-11-05 11:40:29
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪


郝钊(金币+1):谢谢参与
1.质粒被酶污染了
2.buffer被酶污染了
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2010-11-05 18:46:53
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郝钊

金虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):鼓励上图交流。 2010-11-06 09:40:11
其他质粒无论加Buffer,还是加酶都没有问题,说明Buffer和酶都没有问题。现在唯一的问题应该是这个质粒本身。只是不知道会是什么原因。下面是酶切图:
1marker        2 pSK1002      3pSK1002+Buffer        4pSK1002+SalI
5pUC19             6pUC19+Buffer
7pUC19+SalI                 8pUC19+MluI
   9T+EGFP                                  10T+EGFP+Buffer  11T+EGFP+Sal I
6楼2010-11-05 21:48:29
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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是质粒提取过程中被DNase污染了吧
7楼2010-11-05 22:25:19
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xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

质粒污染了
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞!
8楼2010-11-05 23:52:20
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郝钊

金虫 (小有名气)

如果质粒被污染了,那么一号泳道里的原始质粒温育后没问题,是不是没有酶作用的合适条件啊?
9楼2010-11-11 16:05:59
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