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【求助/交流】求教两条互补的单链DNA 杂交条件？ 已有2人参与
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| 两条完全互补的DNA链21bp在什么条件下能够完全杂交，主要是温度，和buffer的条件，有的文献说是室温，有的说是45度。还有杂交多少时间。 |
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susizheng
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两条单链DNA稀释至1 ug/uL（1 OD260nm ssDNA=33 ug计算 ） 各取2 uL，在50 uL 100 mmol/L NaCl和10 mmol/L Tris 的缓冲体系中退火，程序为：90 ℃预变性3 min，缓慢冷却到37 ℃(-0.1 ℃/S)，然后37 ℃ 保温1 h。取3 uL电泳检测聚合情况。 或者可以不用PCR仪，直接简单退火，将体系水浴煮沸，然后室温自然冷却。水浴时最好用比较大体积的水，比如2-3L，保证降温不会太快。 下图，40 bp单链退火图片。  [ Last edited by susizheng on 2010-10-28 at 10:05 ] |
2楼2010-10-28 10:04:35
lychee0924
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