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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】求教两条互补的单链DNA 杂交条件？
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wyy0052

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求教两条互补的单链DNA 杂交条件？ 已有2人参与

两条完全互补的DNA链21bp在什么条件下能够完全杂交，主要是温度，和buffer的条件，有的文献说是室温，有的说是45度。还有杂交多少时间。
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1楼 2010-10-27 21:07:45
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
两条单链DNA稀释至1 ug/uL（1 OD260nm ssDNA=33 ug计算 ）
各取2 uL，在50 uL 100 mmol/L NaCl和10 mmol/L Tris 的缓冲体系中退火，程序为：90 ℃预变性3 min，缓慢冷却到37 ℃(-0.1 ℃/S)，然后37 ℃ 保温1 h。取3 uL电泳检测聚合情况。
或者可以不用PCR仪，直接简单退火，将体系水浴煮沸，然后室温自然冷却。水浴时最好用比较大体积的水，比如2-3L，保证降温不会太快。
下图，40 bp单链退火图片。


[ Last edited by susizheng on 2010-10-28 at 10:05 ]
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-10-28 10:04:35
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lychee0924

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问关于室温下的互补DNA杂交有没有文献可以推荐一下呢？多谢！
赞一下 回复此楼
做好自己。。。
3楼2017-09-19 19:08:38
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