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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于Tn5构建突变体的问题
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ZT19860728

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于Tn5构建突变体的问题 已有2人参与

我用的供体为携带pUTmini—Tn5 Km2质粒的大肠杆菌S17一kpir，受体为痢疾杆菌2457T2a，革兰氏阴性菌，供体和受体菌分别摇管培养后按体积比2：1在无抗平板培养，而后将长出的菌苔刮下稀释，涂布双抗平板即Cm和Kan抗性，且我做了10－1到10－4几个稀释度。问题是总会长出大小菌，并且密密麻麻的，因为我需要大量的突变体做筛选，所以会影响后续点板，求高手指导一下，谢谢！
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1楼 2010-10-25 21:56:54
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zhangjingfei01

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-26 09:36:18
1、痢疾在平板上长出大小菌落很正常（大菌落可能是毒力大质粒丢失的缘故），不知道你用的是什么培养基，试试用营养丰富的BHI培养基，是不是会好一些。
2、杂交完直接涂双抗平板是不是会减少工作量呢。
个人意见，仅供参考，互相切磋，共同提高！
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2楼2010-10-26 09:07:35
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
供体和受体菌分别摇管培养，请问一下你这个步骤是怎么操作的，供体摇菌时要加抗生素吗，那你用不用将供体菌的抗生素清洗了呢
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3楼2013-05-02 22:19:12
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