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ZT19860728

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于Tn5构建突变体的问题 已有2人参与

我用的供体为携带pUTmini—Tn5 Km2质粒的大肠杆菌S17一kpir,受体为痢疾杆菌2457T2a,革兰氏阴性菌,供体和受体菌分别摇管培养后按体积比2:1在无抗平板培养,而后将长出的菌苔刮下稀释,涂布双抗平板即Cm和Kan抗性,且我做了10-1到10-4几个稀释度。问题是总会长出大小菌,并且密密麻麻的,因为我需要大量的突变体做筛选,所以会影响后续点板,求高手指导一下,谢谢!
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zhangjingfei01

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-26 09:36:18
1、痢疾在平板上长出大小菌落很正常(大菌落可能是毒力大质粒丢失的缘故),不知道你用的是什么培养基,试试用营养丰富的BHI培养基,是不是会好一些。
2、杂交完直接涂双抗平板是不是会减少工作量呢。
个人意见,仅供参考,互相切磋,共同提高!
2楼2010-10-26 09:07:35
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
供体和受体菌分别摇管培养,请问一下你这个步骤是怎么操作的,供体摇菌时要加抗生素吗,那你用不用将供体菌的抗生素清洗了呢
3楼2013-05-02 22:19:12
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