24小时热门版块排行榜    

查看: 3113  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

无情草

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】做过膜蛋白表达的看过来

我刚刚开始做膜蛋白(氨基酸转运蛋白)的表达,该膜蛋白是个5次跨膜的蛋白,按理说原核的应该比真核的好表达一点,但之前先用pET28a表达载体宿主BL21做过,后来又做了融合表达(谷胱甘肽标签)还是一点不表达,测序结果表明基因序列没问题,不知道哪里出了问题,跪求高手指导,感激不尽!
回复此楼
最初的梦想
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩

无情草(金币+1): 2010-10-26 10:37:51
呵呵,同意楼上的说法,只试了一个载体一个宿主菌不表达比较正常啊,楼主多试试吧。。。宿主菌和载体都可以尝试换不同的。。
         ♨物是人非事事休,欲语泪先流♨
3楼2010-10-25 21:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

无情草(金币+2): 2010-10-26 10:37:43
看你的意思是你的蛋白源自原核生物,理论上说在原核中表达是比真核膜蛋白在原核中表达要容易。

但是你这里仍然存在几个问题:
1,你是否只试了一个载体,一个宿主?我们手头上有一个真核基因,在大肠中表达的时候筛遍了宿主,最后只在Rosetta gami中表达,而且必须加去垢剂才能溶解。
2,你最后跑SDS-PAGE检测的时候应该是whole cell lysate 吧,煮沸变性了么?

我的直觉是:
你首先可以(必须)筛选宿主,多转化几种宿主细胞看看。或者换标签,GST标签不行,说不定His就可以的例子也是有的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-10-25 21:23:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无情草

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-25 21:23:07:
看你的意思是你的蛋白源自原核生物,理论上说在原核中表达是比真核膜蛋白在原核中表达要容易。

但是你这里仍然存在几个问题:
1,你是否只试了一个载体,一个宿主?我们手头上有一个真核基因,在大肠中表达的 ...

多谢指教,我确实是煮沸全细胞裂解的取的上清加样的,但是没有使用去垢剂溶解,请问是用去垢剂溶解沉淀蛋白吗?
最初的梦想
4楼2010-10-26 10:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无情草

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by foryever at 2010-10-25 21:48:42:
呵呵,同意楼上的说法,只试了一个载体一个宿主菌不表达比较正常啊,楼主多试试吧。。。宿主菌和载体都可以尝试换不同的。。

多谢了,我会的
最初的梦想
5楼2010-10-26 10:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 6/300 2026-08-25 00:11 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见