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xmasylm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么镍柱纯化可溶性蛋白,电泳结果总是显示不纯呢?已有8人参与

3月份做过一次,在200mM咪唑和500mM咪唑洗脱组分中都有很纯的目的蛋白。最近做的时候,总是有杂蛋白。用平衡液洗杂蛋白的体积和时间是差不多的。不知道为什么就是不纯?
蛋白是重组菌落经IPTG大量诱导表达得到。在优化后的条件下表达。(适于可溶性目的蛋白表达)。
还有,我这周在纯化时所用的所有液体都保持在4度左右,这会不会对过柱有影响呢?
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-24 08:39:27
你以前的也不怎么纯啊。
我看着像是降解的原因。理由就是杂带都比你的目的带小。你可以加点蛋白酶抑制剂试试。
低温好像对ni柱影响不大。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2010-10-23 20:54:06
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