应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接体系优化办法
141/2返回列表12下一页
查看: 1613  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接体系优化办法 已有8人参与

我用pTXB1连接一个1194bp的片段，连了很多次，但是一直连不上，体系是
pTXB1  8 ul  目的片断 4 ul  水  5 ul  10*buffer 2 ul  T4 DNA 连接酶 1
请教大家了，急.............
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-15 10:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王会征

铁杆木虫 (著名写手)
silicare:体积比不是摩尔比 2010-10-15 11:52:40
薄荷zwz(金币+1): 2010-10-15 13:16:19
你的连接比例载体：基因是2：1，这个比例不知道你是怎么确定的。一般连接不成功或效果不好和连接比例没控制好有很大关系，所以你要根据酶切回收后的载体基因的浓度确定最佳连接比例。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-15 10:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kissing

新虫 (初入文坛)

连接

把酶切后的目的基因和载体跑胶，用Gis软件分析，精确二者的用量
赞一下 回复此楼
3楼2010-10-15 10:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
做链接载体与目的片段要严格定量，否则连接效率非常低！
赞一下 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
4楼2010-10-15 12:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

补充

我怎么样才能定量呢？那个gis软件是什么，我没用过‘
赞一下 回复此楼
5楼2010-10-15 13:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-15 17:05:19
个人建议：能不能做个正交试验，摸下实验条件，效率低只要转化好了，也行的吧
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-10-15 13:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

回复

什么叫做正交实验，不懂，请教，呵呵
赞一下 回复此楼
7楼2010-10-15 16:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 薄荷zwz at 2010-10-15 16:54:03:
什么叫做正交实验，不懂，请教，呵呵


这是我做的一个小正交试验，你可以把横向换成DNA比例（是mol比例，不是体积比）梯度n，纵向换成体系稀释倍数梯度（或者你想探寻的因素的梯度）m，那么你要做n×m个实验！看看那个效果好！
明白了？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-10-16 09:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励下~ 2010-10-16 09:52:47
关于连接的问题，我是这样觉得的。
很多人说是什么连接体系啦，连接浓度，甚至摩尔比之类的。
关于正交试验，那也太麻烦了，我个人觉得没啥必要，呵呵。
因为连接是个简单而又复杂的过程，很多不可知因素的，相同的连接体系，相同的人去操作，都会出现不同的结果，
所以，我建议你多做，我的经验是你可以在转化的时候分别取不同体积的菌液铺好几个板，这样会好一些，
以上观点仅供参考
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-10-16 09:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢参与~ 2010-10-16 09:52:58
用好的DNA ligase，体系从来不变不优化，照做~~次次成功
连接比3~10:1这么宽的范围都无所谓
爱16度连30分钟或者4度过夜都行，看你连什么片段

话说，我用的是日系的TOYOBO，算是比较中档的酶了
当然另外个国产日系的酶就算了，我已经见过无数用那个做出来砸掉的……
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2010-10-16 09:22:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员Al9wia 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 苦命人。。。 2026-04-18 3/150 2026-04-18 20:54 by 张zhihao
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 化工学硕294分，求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +11 刘墨墨 2026-04-13 11/550 2026-04-17 15:35 by wanganpin
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 300求调剂 +11 橙a777 2026-04-15 11/550 2026-04-16 22:43 by cfdbai
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭