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汕头大学海洋科学接受调剂
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薄荷zwz

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接体系优化办法 已有8人参与

我用pTXB1连接一个1194bp的片段,连了很多次,但是一直连不上,体系是
pTXB1  8 ul  目的片断 4 ul  水  5 ul  10*buffer 2 ul  T4 DNA 连接酶 1
请教大家了,急.............
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢参与~ 2010-10-16 09:52:58
用好的DNA ligase,体系从来不变不优化,照做~~次次成功
连接比3~10:1这么宽的范围都无所谓
爱16度连30分钟或者4度过夜都行,看你连什么片段

话说,我用的是日系的TOYOBO,算是比较中档的酶了
当然另外个国产日系的酶就算了,我已经见过无数用那个做出来砸掉的……
10楼2010-10-16 09:22:46
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

silicare:体积比不是摩尔比 2010-10-15 11:52:40
薄荷zwz(金币+1): 2010-10-15 13:16:19
你的连接比例载体:基因是2:1,这个比例不知道你是怎么确定的。一般连接不成功或效果不好和连接比例没控制好有很大关系,所以你要根据酶切回收后的载体基因的浓度确定最佳连接比例。
2楼2010-10-15 10:42:18
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kissing

新虫 (初入文坛)

连接

把酶切后的目的基因和载体跑胶,用Gis软件分析,精确二者的用量
3楼2010-10-15 10:43:24
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xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

做链接载体与目的片段要严格定量,否则连接效率非常低!
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞!
4楼2010-10-15 12:56:09
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