24小时热门版块排行榜    

查看: 1787  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接体系优化办法 已有8人参与

我用pTXB1连接一个1194bp的片段,连了很多次,但是一直连不上,体系是
pTXB1  8 ul  目的片断 4 ul  水  5 ul  10*buffer 2 ul  T4 DNA 连接酶 1
请教大家了,急.............
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢参与~ 2010-10-16 09:52:58
用好的DNA ligase,体系从来不变不优化,照做~~次次成功
连接比3~10:1这么宽的范围都无所谓
爱16度连30分钟或者4度过夜都行,看你连什么片段

话说,我用的是日系的TOYOBO,算是比较中档的酶了
当然另外个国产日系的酶就算了,我已经见过无数用那个做出来砸掉的……
10楼2010-10-16 09:22:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

王会征

铁杆木虫 (著名写手)

silicare:体积比不是摩尔比 2010-10-15 11:52:40
薄荷zwz(金币+1): 2010-10-15 13:16:19
你的连接比例载体:基因是2:1,这个比例不知道你是怎么确定的。一般连接不成功或效果不好和连接比例没控制好有很大关系,所以你要根据酶切回收后的载体基因的浓度确定最佳连接比例。
2楼2010-10-15 10:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kissing

新虫 (初入文坛)

连接

把酶切后的目的基因和载体跑胶,用Gis软件分析,精确二者的用量
3楼2010-10-15 10:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

做链接载体与目的片段要严格定量,否则连接效率非常低!
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞!
4楼2010-10-15 12:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 09:48 by G6APbkg8SA6w
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:39 by G6APbkg8SA6w
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:38 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见