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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接体系优化办法
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gbrillia

银虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 10:14:53
载体和目的片段的浓度都是可以测量的，根据测得的浓度和载体和片段的分子量算出二者的摩尔数，再确定连接时加入的体积。我们现在用的是eppendorf的分光光度计就能测DNA的浓度
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11楼2010-10-16 09:55:55
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piratenb

新虫 (小有名气)
★
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用NEB的好了
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眼的世界
12楼2010-10-16 10:03:37
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aaron2012

银虫 (初入文坛)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 10:15:01
连接比换成高点   一般是2：1到10：1  都可以的然后连接时间长点  我们一般都是过夜   一般都能连接上   你试一下
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生物，特别是分子生物，贵在坚持！
13楼2010-10-16 10:09:59
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天龙n部

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 14:48:40
你算下你的载体和目的基因的摩尔比，最好达到1：3这样一般就可以额。还有就是可能你的buffer用久了，里面的ATP挥发了，补救措施要么换个新的buffer，要么在原buffer里加点ATP。最后，可能是你的酶失效了，如果你们用煤一直在冰盒里的话一般不会出现这种情况。体系做正交那没必要，不是浪费酶嘛
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14楼2010-10-16 14:12:10
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