【求助/交流】连接体系优化办法 - 分子生物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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银虫 (小有名气)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 10:14:53

载体和目的片段的浓度都是可以测量的，根据测得的浓度和载体和片段的分子量算出二者的摩尔数，再确定连接时加入的体积。我们现在用的是eppendorf的分光光度计就能测DNA的浓度

11楼2010-10-16 09:55:55

新虫 (小有名气)

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用NEB的好了

眼的世界

12楼2010-10-16 10:03:37

银虫 (初入文坛)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 10:15:01

连接比换成高点一般是2：1到10：1 都可以的然后连接时间长点我们一般都是过夜一般都能连接上你试一下

生物，特别是分子生物，贵在坚持！

13楼2010-10-16 10:09:59

金虫 (小有名气)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 14:48:40

你算下你的载体和目的基因的摩尔比，最好达到1：3这样一般就可以额。还有就是可能你的buffer用久了，里面的ATP挥发了，补救措施要么换个新的buffer，要么在原buffer里加点ATP。最后，可能是你的酶失效了，如果你们用煤一直在冰盒里的话一般不会出现这种情况。体系做正交那没必要，不是浪费酶嘛

14楼2010-10-16 14:12:10

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