应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】流式 细胞数量问题
71/1返回列表
查看: 2180  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】流式 细胞数量问题 已有2人参与

今天第一次做流式，是拿到其它分院实验室做的
三管情况是这样的：

第一管，实验组细胞（长期药物处理的细胞），未加抗体（这是某个老师让做的，防止细胞自发荧光）
第二管，对照组（未处理的细胞），加荧光标记的抗体
第三管，实验组（长期药物处理的细胞），加荧光标记的抗体

目的是检测第二管和第三管细胞两者表面蛋白的表达差异。

问题是这样：第三管细胞数量偏少，10分钟时间还没有统计到1000个细胞，人家就不让做了。说是必须到1万个细胞，我提出统计一下荧光值，拿第三组1000细胞和二组10000个细胞比较一下，如果三大于二，一样可以反应问题，可人家说没有统计学意义，让重新做。

其实我离心时就发现第三管细胞数量少于第二管，计数有误差，但主要问题还是离心把细胞丢失的，因为第一管没有离心，细胞数量是没有问题的。

明天再做我该注意什么呢？细胞数量再增加是对的吧，荧光抗体量也多加一点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-11 11:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-10-11 12:10:03
蜗牛VS蜗牛(金币+10): 2010-10-11 16:33:25
一般不会因为离心丢失细胞的，600~800g离5min就足够了，如果是那种国产的15ml离心机，什么飞鸽牌的，大概就是1000~1500rpm 5min
如果发现细胞太少，那就用60mm皿养着，一般都有5次方个细胞了
1000个细胞确实太少，人家不让做是正确的
荧光抗体一般都是根据细胞数加的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-11 11:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-11 11:47:19:
一般不会因为离心丢失细胞的，600~800g离5min就足够了，如果是那种国产的15ml离心机，什么飞鸽牌的，大概就是1000~1500rpm 5min
如果发现细胞太少，那就用60mm皿养着，一般都有5次方个细胞了
1000个细胞确实太少 ...

谢谢三哥前来！
我养的细胞好多的，就是经过计数、离心洗涤、吹打，就丢失了，关键是丢失了我也不知道。
看来还是我操作细节没有把握好，下次做时多加细胞多加抗体试试了。

如果用EP管离心会不会好一些呢，15ml离心管大了些，向200微升CELL悬液中加10微升的抗体时，枪头都伸不到细胞悬液液面（离心管太长，移液枪太大）。
小离心机半径大约是15ml离心机半径的一半，转速也要提高些吧？
赞一下 回复此楼
3楼2010-10-11 16:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-10-11 19:52:16
你看着细胞沉淀不会越来越少就好了
200ul的话，当然用EP管好，15ml很大误差
我习惯用离心力（g）来表示，因为这比转速更加准确……我的建议就是600~800g 5min
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-11 17:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-11 17:20:45:
你看着细胞沉淀不会越来越少就好了
200ul的话，当然用EP管好，15ml很大误差
我习惯用离心力（g）来表示，因为这比转速更加准确……我的建议就是600~800g 5min

这次用EP管离心，细胞数量没有问题了。谢谢，呵呵。
普通的离心机基本上没有自动g与RPM转换的，飞鸽牌的（15毫升离心管用）我按照半径10cm（转速1000），离心1.5毫升EP管的离心机我按半径2cm计算离心力的（转速2230），从而得出要设置的转速2230。这对不对？公式按照高中物理公式计算的F=MRW2
赞一下 回复此楼
5楼2010-10-13 13:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):很热心。 2010-10-13 16:21:45
引用回帖:
Originally posted by 蜗牛VS蜗牛 at 2010-10-13 13:55:33:

这次用EP管离心，细胞数量没有问题了。谢谢，呵呵。
普通的离心机基本上没有自动g与RPM转换的，飞鸽牌的（15毫升离心管用）我按照半径10cm（转速1000），离心1.5毫升EP管的离心机我按半径2cm计算离心力的（转速 ...

http://www.chem17.com/Tech_news/Detail/24346.html
网上随便搜的一点资料
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-10-13 14:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
★
silicare(金币+1):信息反馈 2010-10-15 11:48:21
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-13 14:30:23:


http://www.chem17.com/Tech_news/Detail/24346.html
网上随便搜的一点资料

半径10厘米，RPM=1000，计算出RCF=112
按此RCF反推回去，半径为5厘米的时候，得出RPM为1400.
第一次时算错了，这次是按百度资料中计算的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-10-15 10:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蜗牛VS蜗牛 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭