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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法
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liyong1981

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法已有3人参与

求助-苯酚氯仿纯化DNA方法

哪位大仙有啊，我是纯化质粒用的，不是提取，谢谢了。貌似是先用苯酚氯仿，接着用氯仿，最后是用3M醋酸钠，多谢了。
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1楼2010-10-11 08:12:57
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yaojc

木虫 (正式写手)
看下分子克隆上册
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专注、专心、专业
2楼2010-10-11 08:24:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
liyong1981(金币+1): 2010-10-11 08:55:44
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-11 19:51:42
1.苯酚氯仿抽提
2.接着用氯仿抽提
3.最后用2x无水乙醇、1/10体积的3M醋酸钠（pH5.4）或1/25体积的5M氯化钠沉淀。
4.70%乙醇清洗沉淀，干燥，回溶。
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3楼2010-10-11 08:28:12
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liyong1981

金虫 (正式写手)
上面的说详细点呗，苯酚氯仿不是分层的么？
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4楼2010-10-11 08:41:20
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liyong1981

金虫 (正式写手)
继续求助~
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5楼2010-10-11 08:55:26
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liyong1981

金虫 (正式写手)
dhd997:耐心等待高手解答吧。 2010-10-11 10:23:40
版主！
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6楼2010-10-11 10:13:00
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 10:23:49
liyong1981(金币+3):多谢~ 2010-10-11 10:53:59
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-10-11 08:41:20:
上面的说详细点呗，苯酚氯仿不是分层的么？

分氯仿是互溶的，你所说的分层的上层是tris，因为我们所用的酚是tris饱和酚
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7楼2010-10-11 10:19:14
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
liyong1981(金币+2): 2010-10-11 16:56:17
amisking(金币+3):good！ 2010-10-11 19:51:53
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-10-11 08:41:20:
上面的说详细点呗，苯酚氯仿不是分层的么？

苯酚溶于氯仿
可以直接买配好的酚氯仿，吸下层有机相使用。

如果要自己配，先吸Tris饱和酚（纯化RNA时用水饱和酚），吸下层黄色的（上层是tris缓冲液，起饱和和水封的作用）。和等体积氯仿混匀（异戊醇可加可不加，看心情）。由于苯酚里面有一定的水（tris缓冲液），所以这个混匀的体系是乳浊液，有的实验室直接就用这个乳浊液，有的实验室混匀后离心，弃掉上面的水相，用下层有机相（实际上就是把苯酚从水里萃取到氯仿里）。

两种方法都可以，毕竟那点水不起什么作用，无非是最后吸取的水相体积会变大一点
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8楼2010-10-11 16:35:43
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
liyong1981(金币+1): 2010-10-11 17:38:48
你如果只是纯化DNA的话没必要加那么多东西，只需2倍体积（原始DNA体积）的无水乙醇和0.1倍体积的3M醋酸钠在-20度下2个小时再高速离心吸干上清溶解沉淀即可。
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9楼2010-10-11 17:31:18
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liyong1981

金虫 (正式写手)
要加的，因为俺要去掉连接酶。，呵呵
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10楼2010-10-11 17:39:09
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