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liyong1981

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法已有3人参与

求助-苯酚氯仿纯化DNA方法

哪位大仙有啊,我是纯化质粒用的,不是提取,谢谢了。貌似是先用苯酚氯仿,接着用氯仿,最后是用3M醋酸钠,多谢了。
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
liyong1981(金币+2): 2010-10-11 16:56:17
amisking(金币+3):good! 2010-10-11 19:51:53
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-10-11 08:41:20:
上面的说详细点呗,苯酚氯仿不是分层的么?

苯酚溶于氯仿
可以直接买配好的酚氯仿,吸下层有机相使用。

如果要自己配,先吸Tris饱和酚(纯化RNA时用水饱和酚),吸下层黄色的(上层是tris缓冲液,起饱和和水封的作用)。和等体积氯仿混匀(异戊醇可加可不加,看心情)。由于苯酚里面有一定的水(tris缓冲液),所以这个混匀的体系是乳浊液,有的实验室直接就用这个乳浊液,有的实验室混匀后离心,弃掉上面的水相,用下层有机相(实际上就是把苯酚从水里萃取到氯仿里)。

两种方法都可以,毕竟那点水不起什么作用,无非是最后吸取的水相体积会变大一点
8楼2010-10-11 16:35:43
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yaojc

木虫 (正式写手)

看下分子克隆上册
专注、专心、专业
2楼2010-10-11 08:24:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


liyong1981(金币+1): 2010-10-11 08:55:44
amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-10-11 19:51:42
1.苯酚氯仿抽提
2.接着用氯仿抽提
3.最后用2x无水乙醇、1/10体积的3M醋酸钠(pH5.4)或1/25体积的5M氯化钠沉淀。
4.70%乙醇清洗沉淀,干燥,回溶。
3楼2010-10-11 08:28:12
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liyong1981

金虫 (正式写手)


上面的说详细点呗,苯酚氯仿不是分层的么?
4楼2010-10-11 08:41:20
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