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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法
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liyong1981

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法已有3人参与

求助-苯酚氯仿纯化DNA方法

哪位大仙有啊，我是纯化质粒用的，不是提取，谢谢了。貌似是先用苯酚氯仿，接着用氯仿，最后是用3M醋酸钠，多谢了。
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1楼2010-10-11 08:12:57
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
liyong1981(金币+2): 2010-10-11 16:56:17
amisking(金币+3):good！ 2010-10-11 19:51:53
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-10-11 08:41:20:
上面的说详细点呗，苯酚氯仿不是分层的么？

苯酚溶于氯仿
可以直接买配好的酚氯仿，吸下层有机相使用。

如果要自己配，先吸Tris饱和酚（纯化RNA时用水饱和酚），吸下层黄色的（上层是tris缓冲液，起饱和和水封的作用）。和等体积氯仿混匀（异戊醇可加可不加，看心情）。由于苯酚里面有一定的水（tris缓冲液），所以这个混匀的体系是乳浊液，有的实验室直接就用这个乳浊液，有的实验室混匀后离心，弃掉上面的水相，用下层有机相（实际上就是把苯酚从水里萃取到氯仿里）。

两种方法都可以，毕竟那点水不起什么作用，无非是最后吸取的水相体积会变大一点
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8楼2010-10-11 16:35:43
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-10-11 17:39:09:
要加的，因为俺要去掉连接酶。，呵呵

如果是连接产物做转化，可以不用抽提，直接转。65度保温10min失活连接酶可以提高转化率，但并非必须
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2010-10-12 12:29:22
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