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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】阳性菌中质粒提取方法
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】阳性菌中质粒提取方法 已有4人参与

大家好！我的实验处于瓶颈期，希望能得到大家的帮助！怎样才能从黄色短杆菌或谷氨酸棒杆菌中提取质粒，普通的提取质粒方法全都试过了，都不可行，希望好心人能帮帮忙哈！对于您的帮助将不胜感激！
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选中一个目标，坚持不懈的走下去！
1楼 2010-09-13 17:17:54
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mada1986

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
估计也是破壁的问题 一直在做放线菌的基因组 同样也是细胞壁不好裂解 最后用终浓度5mg/mL的溶菌酶 37℃过夜处理 效果很好 楼主可以试试看
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5楼2012-03-08 12:23:56
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用试剂盒试一试！打电话问试剂公司，咨询一下~
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2楼2010-09-14 15:37:05
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sfxt001

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-15 07:37:53
阳性菌分子操作的一个重要的需要解决的问题就是细胞裂解的是否充分，革兰氏阳性菌的细胞壁非常结实，对于阴性菌好使的SDS碱性裂解液直接用来裂解阳性菌细胞是不好使的，细胞裂不掉，你想抽到质粒，当然是搞不定的。比如说处理金黄色葡萄球菌，在用SDS碱性裂解液之前，就得先用溶葡萄球菌酶处理才行。你好好查查文献，对于你用的菌，有没有什么有针对性的裂解酶，能够先松动你的细菌的细胞壁，后面就好办了。
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3楼2010-09-15 00:31:38
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