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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【讨论】做HPLC时碰到的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sean_zhang

银虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】做HPLC时碰到的问题 已有7人参与

走液相的时候，走梯度从0-50min，甲醇从5%-100%，当走到100%的时候，基线就飘上去不下来了，是为什么咧？
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1楼 2010-08-31 09:52:15
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qcsgx

铜虫 (小有名气)
★
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梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。
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2楼2010-08-31 10:01:29
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★
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走梯度就这样，基线不平很正常，楼主可以走两次空白梯度，如果两次一致，就可以了，不影响分离度就可以了
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药物合成
3楼2010-08-31 10:07:33
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bokai84

禁虫 (小有名气)
★
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4楼2010-08-31 10:54:08
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sean_zhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by luomuwuhen at 2010-08-31 10:07:33:
走梯度就这样，基线不平很正常，楼主可以走两次空白梯度，如果两次一致，就可以了，不影响分离度就可以了

基线飘上去了，真丑，额
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5楼2010-08-31 11:04:14
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sean_zhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bokai84 at 2010-08-31 10:54:08:
可以延长洗脱时间试试吧

这个，怎么延长，从50分钟上去了，基线就不下来了，走了120分钟还是这样
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6楼2010-08-31 11:04:52
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sean_zhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qcsgx at 2010-08-31 10:01:29:
梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波 ...

水是超纯水，有机相也是色谱的，不过不是进口的，话说基线飘与是否进口很大关系么？
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7楼2010-08-31 11:05:45
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by sean_zhang at 2010-08-31 11:04:14:

基线飘上去了，真丑，额

楼主可以把梯度的线性放的缓一些，比如100min内由5%升到100%，或者可以从50%50min内升到100%
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药物合成
8楼2010-08-31 11:30:23
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hustyookie

金虫 (正式写手)
★
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走梯度的时候,水相和有机相的比例一直在变,无法达到平衡状态,基线上飘是必然的.
不过楼上说的对,线性缓一些可以让上飘小一些.
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9楼2010-08-31 16:15:56
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sean_zhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by luomuwuhen at 2010-08-31 11:30:23:

楼主可以把梯度的线性放的缓一些，比如100min内由5%升到100%，或者可以从50%50min内升到100%

谢谢，学习了！
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10楼2010-08-31 17:23:25
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