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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助间接Elisa法测多抗效价具体步骤
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xieyin717

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1楼2010-08-23 15:53:52
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jinjiniao8198

铜虫 (小有名气)
★ ★
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-08-30 18:42:13
xieyin717(金币+5): 2010-08-31 16:06:06
你可以先采用包被原浓度为2μg/mL，按间接ELISA法测抗体效价。
其实验步骤如下：
（1）包被：将包被原用包被液稀释成2μg/mL，每孔100μL， 4℃包被过夜。
（2）洗涤：3次。（250μL）
（3）封闭：1％的OVA每孔250μL，37℃孵育2h。
（4）洗涤：3次（250μL）
（5）加入免疫血清：用PBS液将小鼠血清倍比稀释成不同浓度，（按照1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600，1：3200，…）每个浓度一排，同时设空白对照和阴性对照，每孔100μL，加完后，于37℃温箱孵育1h。
（6）洗涤：3次。（250μL）
（7）加酶标二抗（羊抗鼠-HRP）：用PBS液将酶标二抗稀释成工作浓度（1：5000），加到96孔酶标板，每孔100μL，加完后，于37℃温箱孵育1h。
（8）洗涤：3次。（250μL）
（9）加底物：每孔100μL，加完后，于37℃温箱避光放置20min。（底物A:底物B=1:100）
（10）终止：每孔加2mol/L的H2SO450μL，用酶标仪测定OD450值。
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2楼2010-08-30 17:01:39
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-30 21:19:31
间接ELISA方法在很多教科书上都有的，还有详细的溶液配方。你可以自己先检索然后不明白的地方发帖子问。
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52187644
3楼2010-08-30 19:28:54
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xieyin717

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4楼2010-08-31 16:21:07
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qiqilao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们实验室做的跟一楼的是一样的
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5楼2010-08-31 16:35:58
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yinying716

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般阴性血清按照多少倍稀释啊？
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加油
6楼2010-11-29 11:31:48
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15838065302

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阴性血清稀释倍数和阳性血清一样 几个梯度
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要努力呼呼
7楼2012-11-15 17:21:12
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