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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】关于DNA提取后测定OD值的问题
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lccc1995

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA提取后测定OD值的问题 已有8人参与

我用试剂盒提取DNA之后，想测一下DNA的浓度和纯度。我看书上说要先将DNA溶液稀释再进行吸光度的测定，我想问一下，这是用纯水稀释还是用缓冲液稀释？还有，要是得到的OD260/OD280偏低，只是说明纯度不够吗？那还能继续做后续的工作吗？

刚接触这方面的东西，很多东西都不太懂，谢谢哈~
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得不到的永远在骚动，被偏爱的都有恃无恐
1楼 2010-08-12 15:55:49
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Lee_Py

银虫 (小有名气)
一般情况 用水做空白对照  加水稀释50倍 取1微测od DNA的一般在1.8左右 太低或太高 就有可能是蛋白质或者RNA没除干净  建议做个纯化 不过 也看你接下来做什么了
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10楼2010-09-10 15:43:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
lccc1995(金币+2): 2010-08-12 16:13:33
用水还是Tris-buffer还是TE buffer洗脱得到的DNA呢？
不过其实稀释倍数很大（100倍以上）的话，用水测也行~如果担心有影响就用相应的buffer，个人经验，后面两种盐溶液用水做空白参比的话，测出来是负值
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2楼2010-08-12 15:58:43
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lccc1995

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-12 15:58:43:
用水还是Tris-buffer还是TE buffer洗脱得到的DNA呢？
不过其实稀释倍数很大（100倍以上）的话，用水测也行~如果担心有影响就用相应的buffer，个人经验，后面两种盐溶液用水做空白参比的话，测出来是负值

=============================================
我用水稀释的，然后用水做的空白，得到的比值是1.5，没有在1.7-1.9之间。用水稀释会影响这个结果吗？还用高手，问问哈，要是得到的OD比是1.5，还能做后续的工作吗？我想做SNP来着~
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得不到的永远在骚动，被偏爱的都有恃无恐
3楼2010-08-12 16:03:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1): 2010-08-12 19:56:09
引用回帖:
Originally posted by lccc1995 at 2010-08-12 16:03:50:

=============================================
我用水稀释的，然后用水做的空白，得到的比值是1.5，没有在1.7-1.9之间。用水稀释会影响这个结果吗？还用高手，问问哈，要是得到的OD比是1.5，还能做后续的工作 ...

不怕，绝对能做后续实验~PCR实验也没那么娇气
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4楼2010-08-12 16:16:33
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