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fair72

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC如何分开两峰 已有4人参与

用HPLC1100做槟榔药材的生物碱含量测定,测定三种生物碱:去甲基槟榔次碱,槟榔次碱,槟榔碱,此顺序也为出峰顺序,用0.5%磷酸和乙腈(40:60)等度洗脱,所有峰可以在10min内出完,但图谱之中,槟榔次碱峰总是连着另一个未知峰,而且连得很紧,怎么分都分不开,影响了槟榔次碱的含量测定,而且同样的样品我进样的重现性也差,请问怎样才能分开两峰呢
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jiusjiu

木虫 (正式写手)


生物碱本来就很难分离,楼主提到的三种生物碱要想较好的分离度和峰型最好尝试采用极性C18来梯度分离。至于重复性原因是楼主采用的添加剂为磷酸,建议采用盐来分离这样会更好一些
7楼2010-08-11 13:12:45
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pplover

荣誉版主 (著名写手)

你说的怎么分都分不开,是都用过什么方法啊?仅改变了磷酸和乙腈的比例,还是其他流动相也尝试过了呢?如果酸化过强,对柱子的分离效果也有影响的。我们一般用的是0.1%的磷酸水。
一个人的美丽是认真!两个人能在一起是缘分!
2楼2010-08-10 21:04:39
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huht

木虫 (小有名气)

楼主的意思应该是调整了比例也没分开,可以尝试不同ph值或更换其它缓冲盐试试
3楼2010-08-10 22:06:07
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xiaoxiao7239

木虫 (小有名气)

如果那两个连在一起的峰是同分异构体,lz就杯具了。可是试试加单标,用来确定是否为同分异构体,如果是,建议考虑别的定量和定性的方法,RP-HPLC很难分开同分异构体。如果不是同分异构体,建议考虑调整流动相pH值。
4楼2010-08-11 06:37:56
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