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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】HPLC如何分开两峰
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fair72

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC如何分开两峰 已有4人参与

用HPLC1100做槟榔药材的生物碱含量测定，测定三种生物碱：去甲基槟榔次碱，槟榔次碱，槟榔碱，此顺序也为出峰顺序，用0.5%磷酸和乙腈（40:60）等度洗脱，所有峰可以在10min内出完，但图谱之中，槟榔次碱峰总是连着另一个未知峰，而且连得很紧，怎么分都分不开，影响了槟榔次碱的含量测定，而且同样的样品我进样的重现性也差，请问怎样才能分开两峰呢
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没有失败，只有放弃
1楼 2010-08-10 20:45:52
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fair72

银虫 (小有名气)
谢谢各位高手的指点，我换过流动相的比例，0.5%磷酸参照的是文献，还没有变过，可以去尝试一下，PH原来用三乙胺调的3.8，后来调到3.5，分离效果没有改善，就没有调了，应该不是同分异构体，不知各位还可否指点一下，而且同样的方法一个月以前做的比现在做的分离效果要好
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没有失败，只有放弃
6楼2010-08-11 09:34:06
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pplover

荣誉版主 (著名写手)
你说的怎么分都分不开，是都用过什么方法啊？仅改变了磷酸和乙腈的比例，还是其他流动相也尝试过了呢？如果酸化过强，对柱子的分离效果也有影响的。我们一般用的是0.1%的磷酸水。
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一个人的美丽是认真！两个人能在一起是缘分！
2楼2010-08-10 21:04:39
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huht

木虫 (小有名气)
楼主的意思应该是调整了比例也没分开，可以尝试不同ph值或更换其它缓冲盐试试
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3楼2010-08-10 22:06:07
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xiaoxiao7239

木虫 (小有名气)
如果那两个连在一起的峰是同分异构体，lz就杯具了。可是试试加单标，用来确定是否为同分异构体，如果是，建议考虑别的定量和定性的方法，RP-HPLC很难分开同分异构体。如果不是同分异构体，建议考虑调整流动相pH值。
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4楼2010-08-11 06:37:56
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