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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】FITC与短肽的连接问题，直接混合
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】FITC与短肽的连接问题，直接混合 已有7人参与

我看到文献中关于FITC与短肽的连接是通过直接混合实现的
是不是FITC可以与短肽中的氨基反应，或者其它原因
反应短肽的氨基与FITC的摩尔比或短肽与FITC的质量比如何设定呢
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1楼 2010-08-03 12:09:33
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luwowo

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):新虫，鼓励下，欢迎常来~~ 2010-08-03 21:14:46
蜗牛VS蜗牛(金币+3): 2010-08-04 08:41:07
我没做过短肽，但是我曾经做过FITC标记胶原蛋白，的确相互混合就能反应，没什么特异性。一般染料会过量，所以可能事后处理会比较麻烦，一定要把单体透析干净，而且不保证不会有单体残留。
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2楼2010-08-03 12:43:17
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by luwowo at 2010-08-03 12:43:17:
我没做过短肽，但是我曾经做过FITC标记胶原蛋白，的确相互混合就能反应，没什么特异性。一般染料会过量，所以可能事后处理会比较麻烦，一定要把单体透析干净，而且不保证不会有单体残留。

即使透析，也要大体确定可能的结合比例
不然浪费是不科学的
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3楼2010-08-03 20:55:52
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
而且我用的FITC是用高分子物质修饰的，穿不透细胞膜
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4楼2010-08-03 20:56:19
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hsiaohu

新虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+1):鼓励新人交流 2010-08-07 00:11:35
scelab(金币+1):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-07 09:39:54
FITC的异硫氰基很容易与蛋白质的氨基反应，搅一搅就可以，透析纯化。
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在孤獨中享受寂寞，在寂寞中厮殺黎明。我需要的是安靜与潜心。
5楼2010-08-03 23:05:32
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hsiaohu at 2010-08-03 23:05:32:
FITC的异硫氰基很容易与蛋白质的氨基反应，搅一搅就可以，透析纯化。

FITC被葡聚糖修饰后，异硫氰基不消失吧，有多少个这样的基团
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6楼2010-08-04 08:42:16
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silicare

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合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
看天(金币+1):鼓励 2010-08-07 00:11:11
用交联缓冲液，这个配方到处都是，关键点是ph要调好，酸性下FITC会不可逆淬灭的
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7楼2010-08-04 09:23:27
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hsiaohu

新虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2):鼓励 2010-08-07 00:11:00
蜗牛VS蜗牛(金币+7): 2010-09-02 06:57:10
引用回帖:
Originally posted by 蜗牛VS蜗牛 at 2010-08-04 08:42:16:

FITC被葡聚糖修饰后，异硫氰基不消失吧，有多少个这样的基团

FITC的结构很容易查到。要看看葡聚糖怎么修饰FITC，如果共价连接到异硫氰基或者由于空间位阻阻止异硫氰基发挥作用，有效异硫氰基数都会减少，不过做个标记反应还是足够的

缓冲液要碱性的，我都用pH 9.0的CBS。
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在孤獨中享受寂寞，在寂寞中厮殺黎明。我需要的是安靜与潜心。
8楼2010-08-07 00:04:35
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zdy1398

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用PH9的碳酸盐缓冲液，4℃ 避光 8h
我也做FITC与肽的连接，请问你连接上以后FITC-peptide在酸性条件下会不会水解？
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9楼2010-12-15 13:34:02
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们一直用上海生工进口的蛋白FITC荧光素标记试剂盒，质量很好，也很方便。
HOOK™ Dye Labeling Kit (FITC)
蛋白FITC荧光素标记试剂盒       
Description:
FITC (fluorescein isothiocyanate) is a commonly used fluorescent label for proteins, as it contains the groups required for conjugating to amino, sulfhydryl, imidazoyl, tyrosyl or carbonyl groups of proteins. FITC has a molecular weight of 389, and excitation and emission wavelengths of 494nm and 520nm, respectively, therefore emitting green visible light.This kit utilizes Tube-O-Reactor™, which allows for the reactions to be performed in a single tube, with no loss of essential reagents and minimum hands-on time and effort.
Features:
Dye preweighed and supplied in single use  vials (Also available separately);Suitable for most proteins;Utilizes single Tube Reactor for minimum hands on time.application for Labeling of a green fluorescent dye to proteins and peptides. And Suitable for antibody labeling. Store: -15～-20℃
编号        包装        价格        产地
786-059        5 Reactions        2,486        GBios
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10楼2010-12-15 14:04:42
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