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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 【求助】SPDP与短肽能连接吗？
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蜗牛VS蜗牛

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[交流] 【求助】SPDP与短肽能连接吗？ 已有3人参与

SPDP与蛋白形成二硫键连接物，那么能形成连接物的蛋白需要具备什么条件？
一些小肽可以与SPDP形成连接物吗？像短肽“N”-LSPPRYPGGGS-NH2可以吗？

[ Last edited by americanyk on 2010-7-19 at 11:07 ]
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1楼 2010-07-19 10:27:20
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yzhuang

金虫 (小有名气)
★
americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-19 11:07:38
蜗牛VS蜗牛(金币+5): 2010-07-19 18:20:02
蛋白表面（不是内部疏水区）具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时，在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基，以作进一步反应之用。
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2楼2010-07-19 16:47:56
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蜗牛VS蜗牛

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Originally posted by yzhuang at 2010-07-19 16:47:56:
蛋白表面（不是内部疏水区）具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时，在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基，以作进一步反应之用。

非常感谢！
SPDP可以活化短肽的N-端！那么它对小肽中赖氨酸的游离氨基是否可以活化？
不经济就是多用了SPDP还有反应步骤麻烦了是吗？
我本来是想用DSPE-PEG系列开展实验，初期牵一些偶合反应，这方面我们很多不懂。多谢指教。。。
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3楼2010-07-19 18:25:21
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Originally posted by yzhuang at 2010-07-19 16:47:56:
蛋白表面（不是内部疏水区）具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时，在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基，以作进一步反应之用。

mPEG-mal,mPEG-COOH
两者都可以与带有赖氨酸的小肽偶合吗？
还是直接与小肽的NH2末端偶联的？
如果mPEG-COOH可以的话，为什么看到的都是用mPEG-mal，用mPEG-mal还挺麻烦的，还牵到其它一些反应。
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4楼2010-07-19 18:48:11
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eleven321

金虫 (正式写手)
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americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-20 10:39:56
老实说不太好接 且分离没HPLC的话 ，有些难度
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5楼2010-07-20 11:19:44
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yzhuang

金虫 (小有名气)
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蜗牛VS蜗牛(金币+3): 2010-07-20 17:32:11
americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-20 10:39:44
1. mPEG-COOH 与小肽N-端，可采用EDC方法缩合，但肽本身同时具有COOH和NH2，会发生交连；因此要使用足够过量的mPEG-COOH。
2. 使用mPEG-mal，须在肽末端引入SH。推荐方法，a. 如前所述，合成肽时引入Cys，然后直接与mPEG-mal偶联。或者，b. 使用EDC/Cystamine方法，在小肽的C-端引入SH。
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6楼2010-07-20 17:11:13
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蜗牛VS蜗牛

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引用回帖:
Originally posted by yzhuang at 2010-07-20 17:11:13:
1. mPEG-COOH 与小肽N-端，可采用EDC方法缩合，但肽本身同时具有COOH和NH2，会发生交连；因此要使用足够过量的mPEG-COOH。
2. 使用mPEG-mal，须在肽末端引入SH。推荐方法，a. 如前所述，合成肽时引入Cys，然后直 ...

我的肽是导向肽，如果为了保持肽的活性，直接在合成肽时把CYS接到C末端或者N末端吧？两方面有差异吗？是不是很难确定
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7楼2010-07-20 17:33:58
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yzhuang

金虫 (小有名气)
★
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1. 设计偶联方法时，你应考察/了解清楚所用肽的活性及其影响因素。不清楚的就要查文献或做实验确证。

2. 合成末端（C-端或N-端）的选择，偶联共价键的选择（如若PEG会影响肽活性，则应设计可降解共价方式，如二硫键），这些都是你实验考察的对象。
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8楼2010-07-20 19:48:33
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