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[交流] 【求助】SPDP与短肽能连接吗? 已有3人参与

SPDP与蛋白形成二硫键连接物,那么能形成连接物的蛋白需要具备什么条件?
一些小肽可以与SPDP形成连接物吗?像短肽“N”-LSPPRYPGGGS-NH2可以吗?

[ Last edited by americanyk on 2010-7-19 at 11:07 ]
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yzhuang

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americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-19 11:07:38
蜗牛VS蜗牛(金币+5): 2010-07-19 18:20:02
蛋白表面(不是内部疏水区)具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时,在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基,以作进一步反应之用。
2楼2010-07-19 16:47:56
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引用回帖:
Originally posted by yzhuang at 2010-07-19 16:47:56:
蛋白表面(不是内部疏水区)具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时,在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基,以作进一步反应之用。

非常感谢!
SPDP可以活化短肽的N-端!那么它对小肽中赖氨酸的游离氨基是否可以活化?
不经济就是多用了SPDP还有反应步骤麻烦了是吗?
我本来是想用DSPE-PEG系列开展实验,初期牵一些偶合反应,这方面我们很多不懂。多谢指教。。。
3楼2010-07-19 18:25:21
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引用回帖:
Originally posted by yzhuang at 2010-07-19 16:47:56:
蛋白表面(不是内部疏水区)具有NH2。SPDP可以活化短肽的N-端。但不是经济的方法。可考虑合成小肽时,在其末端多接一个cys, 从而引入一个自由巯基,以作进一步反应之用。

mPEG-mal,mPEG-COOH
两者都可以与带有赖氨酸的小肽偶合吗?
还是直接与小肽的NH2末端偶联的?
如果mPEG-COOH可以的话,为什么看到的都是用mPEG-mal,用mPEG-mal还挺麻烦的,还牵到其它一些反应。
4楼2010-07-19 18:48:11
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eleven321

金虫 (正式写手)

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americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-20 10:39:56
老实说不太好接 且分离没HPLC的话 ,有些难度
5楼2010-07-20 11:19:44
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yzhuang

金虫 (小有名气)

★ ★
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蜗牛VS蜗牛(金币+3): 2010-07-20 17:32:11
americanyk(金币+1):Thank you 2010-07-20 10:39:44
1. mPEG-COOH 与小肽N-端,可采用EDC方法缩合,但肽本身同时具有COOH和NH2,会发生交连;因此要使用足够过量的mPEG-COOH。
2. 使用mPEG-mal,须在肽末端引入SH。推荐方法,a. 如前所述,合成肽时引入Cys,然后直接与mPEG-mal偶联。或者,b. 使用EDC/Cystamine方法,在小肽的C-端引入SH。
6楼2010-07-20 17:11:13
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引用回帖:
Originally posted by yzhuang at 2010-07-20 17:11:13:
1. mPEG-COOH 与小肽N-端,可采用EDC方法缩合,但肽本身同时具有COOH和NH2,会发生交连;因此要使用足够过量的mPEG-COOH。
2. 使用mPEG-mal,须在肽末端引入SH。推荐方法,a. 如前所述,合成肽时引入Cys,然后直 ...

我的肽是导向肽,如果为了保持肽的活性,直接在合成肽时把CYS接到C末端或者N末端吧?两方面有差异吗?是不是很难确定
7楼2010-07-20 17:33:58
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yzhuang

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1. 设计偶联方法时,你应考察/了解清楚所用肽的活性及其影响因素。不清楚的就要查文献或做实验确证。

2. 合成末端(C-端或N-端)的选择,偶联共价键的选择(如若PEG会影响肽活性,则应设计可降解共价方式,如二硫键),这些都是你实验考察的对象。
8楼2010-07-20 19:48:33
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