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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何? 已有5人参与

如题,请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何?怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现?

每当双切片段和载体连接时,总是出现假阳性。郁闷啊!

恳请高手帮忙啊
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wh7690703

木虫 (正式写手)

NdeI/XhoI和BglII/XhoI都双切过T-目的片段,而且都切下来了
不过有个奇怪的现象:当双切目的片段和双切表达载体连接转化后,筛阳性重组子进行双酶切验证时,总会有很多的质粒切出T-载体大小的片段。
11楼2010-08-17 11:19:57
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jqq1985

银虫 (正式写手)


看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49
NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ,BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关,两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。
2楼2010-08-03 12:49:01
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12
我用过这两组酶,NEB和Fermentas都还是不错的
3楼2010-08-03 13:36:55
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wh7690703

木虫 (正式写手)

我使用的是Takara的酶,两组酶酶切总是不彻底,根本就筛选不到阳性克隆子
4楼2010-08-04 09:36:32
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