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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么知道转染成功了？
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llxxdl620

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么知道转染成功了？ 已有7人参与

想让DNA转到Hela细胞中去，用磷酸钙转染可行不？转染后我怎么证明DNA转染进去了呢?我是个外行，多谢大家帮帮忙啊！
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1楼 2010-07-28 10:37:48
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yangjianhai326

木虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):谢谢 2010-07-28 15:22:14
首先搞明白目的基因是什么？表达的蛋白是什么特征？然后观察蛋白的表达。目前常用的目的基因有表达荧光素酶和表达绿色荧光蛋白
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入职了，人生忙碌的开始！
2楼2010-07-28 10:50:13
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bunny0512

银虫 (小有名气)
llxxdl620(金币+5): 2010-07-28 10:55:59
我是小白 我默认转染就是电转细胞,我电转好的细胞都带正负筛  用R1(G148+GNAC)筛选   三天后换R1+G418  最后的克隆再鉴定
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在哪里~在哪里见过你~
3楼2010-07-28 10:55:20
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llxxdl620

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yangjianhai326 at 2010-07-28 10:50:13:
首先搞明白目的基因是什么？表达的蛋白是什么特征？然后观察蛋白的表达。目前常用的目的基因有表达荧光素酶和表达绿色荧光蛋白

我的只是想让一条DAN链进到细胞里去，在进行电化学检测的，不是想把DNA转到细胞里进行表达的，如果是我这样的话是不是就没有办法证明了呢？
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4楼2010-07-28 10:55:49
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henkally

禁虫 (著名写手)
llxxdl620(金币+1):5 2010-07-28 11:01:14
本帖内容被屏蔽
5楼2010-07-28 10:56:23
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henkally

禁虫 (著名写手)
llxxdl620(金币+5): 2010-07-28 11:01:03
本帖内容被屏蔽
6楼2010-07-28 10:58:59
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llxxdl620

金虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by henkally at 2010-07-28 10:58:59:


电化学我们不太懂哈,不过你转个单链DNA,我倒觉得你转染之前,用荧光分子(如FITC)或同位素标记一下你的单链DNA,不就方便检测了么 [/quo




能弱弱的问一句不，单纯的细胞有没有荧光啊或者是紫外呢？
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7楼2010-07-28 11:03:02
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quight

金虫 (正式写手)
我觉得直接检测有没有表达蛋白就行了，这个是最直观的方法
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JUSTBEYOURSELF
8楼2010-07-28 11:09:54
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henkally

禁虫 (著名写手)
llxxdl620(金币+5): 2010-08-16 08:49:53
本帖内容被屏蔽
9楼2010-07-28 11:10:37
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yangjianhai326

木虫 (小有名气)
llxxdl620(金币+5): 2010-08-16 08:49:44
引用回帖:
Originally posted by llxxdl620 at 2010-07-28 10:55:49:



我的只是想让一条DAN链进到细胞里去，在进行电化学检测的，不是想把DNA转到细胞里进行表达的，如果是我这样的话是不是就没有办法证明了呢？

那你只能对DNA做荧光标记了，然后通过荧光显微镜或者激光共聚焦观察
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入职了，人生忙碌的开始！
10楼2010-07-28 11:30:11
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