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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白酶去信号肽可以正常表达吗？和表达载体有关吗？
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白酶去信号肽可以正常表达吗？和表达载体有关吗？ 已有3人参与

我最近在做木瓜蛋白酶的克隆表达，去除自身信号肽的26个氨基酸（78个碱基）后，设计引物克隆后面部分的碱基序列，用的表达载体是pet20b和一个本实验室的热激载体，这两个载体上都有信号肽序列，经过诱导表达后发现pet20b的可以表达目的蛋白，但活性较小，热激载体的无目的蛋白条带，所以现在就在考虑是否蛋白酶去除了自身信号肽后表达活性受较大影响，和表达载体会有关系吗，或者该植物来源的木瓜蛋白酶需要在原核中改成其可以识别的优势密码子表达才可，请教这里的高手给些建议和意见，谢谢了！
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1楼 2010-07-19 21:45:18
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
蛋白酶的细胞毒性很强，我怀疑在表达过程中已经伤害到了细胞，特别热激载体不是严格调控的表达载体，表达后没有任何目的蛋白条带，不知道大家对用这样的载体做此类表达有没有什么建议啊？
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4楼2010-07-21 00:58:16
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-21 04:33:47
去掉信号肽是可以正常表达，并且优化成大肠杆菌偏爱密码子有利于表达。
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2楼2010-07-20 08:28:06
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-21 04:33:57
信号肽简单的 说就是蛋白表达后告诉蛋白去什么地方的。一般很多载体上都会有此类功能的序列，所以去掉是可以的。
赞一下(2人) 回复此楼
52187644
3楼2010-07-20 10:45:43
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