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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】枯草芽孢杆菌转外源基因
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louli

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】枯草芽孢杆菌转外源基因 已有7人参与

我做完枯草芽孢杆菌感受态后，进行转化，板子长菌后，提质粒没有带，但是PCR有我的目的带，同样的问题也出现在纳豆芽孢杆菌中，请问怎么回事啊！

[ Last edited by louli on 2010-7-18 at 09:39 ]
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1楼 2010-07-18 09:37:00
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steamsn

金虫 (小有名气)
louli(金币+1): 2010-07-19 09:29:36
你的连接有问题
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我命由我不由天
2楼2010-07-18 10:35:23
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-18 14:08:53
louli(金币+1): 2010-07-19 09:29:30
你转化的是什么？构建好的质粒吗？
PCR用的是什么引物，如果是基因特异性引物的话，只能说明你的基因在这两个宿主中也都存在。
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Thank-you，so-blue.
3楼2010-07-18 13:06:46
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louli

铜虫 (小有名气)
我的表达载体是买的，引物是自己设计的，目的片段才467bp，目的片段与表达载体连接之后的重组子已经成功在大肠杆菌Rosetta中表达了，但是在枯草中转化也长菌了，鉴定时候质粒没有带，怎么解决呢
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4楼2010-07-19 08:55:07
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steamsn

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是跟大肠杆菌中一样的重组子吗?重新转化一次试试,有时候你转进去的可能是空质粒,所以也会生长
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我命由我不由天
5楼2010-07-19 11:43:33
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louli

铜虫 (小有名气)
一样的东西啊 重转了好多遍都不行啊 今天又做了 晚上才知道成不成功呢 估计没戏
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6楼2010-07-20 17:05:25
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dyszz

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也有个相同的问题，目前的我枯草芽孢杆菌也是把抗性质粒弄进去了，在抗性板子上生长状况良好，

但是在质粒上的抗性基因容易丢失，想要把质粒上的抗性标记基因转进染色体基因组中，
有没有高人指点一下“？最好介绍一下具体的方法~
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7楼2010-07-26 16:13:50
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louli

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dyszz at 2010-07-26 16:13:50:
我也有个相同的问题，目前的我枯草芽孢杆菌也是把抗性质粒弄进去了，在抗性板子上生长状况良好，

但是在质粒上的抗性基因容易丢失，想要把质粒上的抗性标记基因转进染色体基因组中，
有没有高人指点一下“？最 ...

请问你的枯草芽孢感受态怎么做的啊 我感觉我的感受态做的有问题，现在就是不长菌了！能告诉我你的感受态方法吗？谢谢啦
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8楼2010-07-27 08:42:47
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dyszz

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-07-27 08:42:47:



请问你的枯草芽孢感受态怎么做的啊 我感觉我的感受态做的有问题，现在就是不长菌了！能告诉我你的感受态方法吗？谢谢啦

我不知道师兄怎么转的，是从德国带回来的。。据说做了一年多才弄进去那个质粒，，现在让我把质粒弄到染色体中，，真要命。。
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9楼2010-07-27 09:32:34
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louli

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dyszz at 2010-07-27 09:32:34:



我不知道师兄怎么转的，是从德国带回来的。。据说做了一年多才弄进去那个质粒，，现在让我把质粒弄到染色体中，，真要命。。

能帮忙问问嘛？我的实验一直都卡在这了，就是进行不下去啦！呵呵 帮帮忙呗！
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10楼2010-07-27 11:38:17
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