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louli

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】枯草芽孢杆菌转外源基因 已有7人参与

我做完枯草芽孢杆菌感受态后,进行转化,板子长菌后,提质粒没有带,但是PCR有我的目的带,同样的问题也出现在纳豆芽孢杆菌中,请问怎么回事啊!

[ Last edited by louli on 2010-7-18 at 09:39 ]
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louli

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dyszz at 2010-07-26 16:13:50:
我也有个相同的问题,目前的我枯草芽孢杆菌也是把抗性质粒弄进去了,在抗性板子上生长状况良好,

但是在质粒上的抗性基因容易丢失,想要把质粒上的抗性标记基因转进染色体基因组中,
有没有高人指点一下“?最 ...

请问你的枯草芽孢感受态怎么做的啊 我感觉我的感受态做的有问题,现在就是不长菌了!能告诉我你的感受态方法吗?谢谢啦
8楼2010-07-27 08:42:47
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查看全部 19 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-18 14:08:53
louli(金币+1): 2010-07-19 09:29:30
你转化的是什么?构建好的质粒吗?
PCR用的是什么引物,如果是基因特异性引物的话,只能说明你的基因在这两个宿主中也都存在。
Thank-you,so-blue.
3楼2010-07-18 13:06:46
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louli

铜虫 (小有名气)

我的表达载体是买的,引物是自己设计的,目的片段才467bp,目的片段与表达载体连接之后的重组子已经成功在大肠杆菌Rosetta中表达了,但是在枯草中转化也长菌了,鉴定时候质粒没有带,怎么解决呢
4楼2010-07-19 08:55:07
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steamsn

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是跟大肠杆菌中一样的重组子吗?重新转化一次试试,有时候你转进去的可能是空质粒,所以也会生长
我命由我不由天
5楼2010-07-19 11:43:33
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