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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我的Elisa 实验方法
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plantaqp

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】我的Elisa 实验方法 已有3人参与

ELISA
实验需要准备的buffer：
Buffer Carbonate-Bicarbonate 1M, pH 9.5 :
Dissolve 35g de Na2CO3 and 56g de NaHCO3 in 800ml water and  adjust to 1
liter

PBS 10X (for 1L):

KH2PO4         40 mM                MW = 136.09                5.44 g/l
Na2HPO4        160 mM        MW = 268.07                42.9 g/l
NaCl                1,15 M         MW = 58.44                 67.2 g/l
Adjust to  pH 7,3 with NaOH 6N

PBS-T :PBS 1X, Tween-20 0.1%

PBS-TB :
PBS 1X, BSA 1%, Tween-20 0.1%

ABTS :
250 mg in 500 ml citric acid anhydrous 0.1M, pH 4.35 (with NaOH) .
Aliquote by 10 ml et store  at  –20°C ;
For activity test  use 10ml ABTS, add 10 µl d’H2O2 30% and use in the following 20 minutes.

Solution STOP (= option)
80g SDS in 200ml H2O (40%) + 200 ml DMF (N,N-diméthyl formamide);
实验步骤：

        Load 100 ul antigen (PM at 0.02-5ng/ul or peptide at 0.5-25 pg/ul) (in buffer carbonate-bicarbonate 0.1M, pH 9.5) in wells of microtitration plaque Nunc “Maxi-Sorp Immuno Plate”.
        Incubate overnight at  4°C or 1-2h at 37°C ;
        Empty out the plate and rinse once with PBS 1X ;
        Saturate  sites with 200µl of PBS-TB for 30’ at 37°C ;
        Rinse 3 times with PBS-T ;
        Incubate with 100µl primary antibody  (1/2000 for AntiPIP2 and anti-PIP1 in PBS-TB) for 1-2 hours at  37°C ;
        Rinse 5 times with PBS-T ;
        Incubate with 100µl secondary antibody (1/2500 for Anti-rabbit HRP conjugated, in PBS-TB) for 1-2 h  à 37°C ;
        Rinse 5 times with PBS 1X ;
        Add 100µl de substrate (ABTS) and read at 416nm (or 405nm) après 2-30 min (program ELISA 405nm on VICTOR).

[ Last edited by plantaqp on 2010-7-14 at 22:22 ]
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1楼 2010-07-14 22:15:10
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plantaqp

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06: 2010-07-14 23:20:02
先解释一下，是用来定量的方法（说白了就是western blot，只是简单容易很多）。我看了很多所谓的理论很复杂，我觉得很容易上手，也是很常用的方法。
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2楼2010-07-14 22:18:14
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xiaomage9527

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学习了  谢谢楼主
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3楼2010-07-15 10:28:17
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
步骤都是相同的，只是你提到的还是比较老的方法了。现在开发了很多新方面了。可以多多学习下。
赞一下(1人) 回复此楼
52187644
4楼2010-07-15 10:48:49
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plantaqp

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-07-15 10:48:49:
步骤都是相同的，只是你提到的还是比较老的方法了。现在开发了很多新方面了。可以多多学习下。

实用是硬道理，新的而不一定实用。
新的知道有那么回事就好了等用了在仔细研究，谢谢提醒。
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-15 19:11:22
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