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slightshiner金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】HPLC分离求助已有6人参与
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本人正在分离几个氨基酸衍生物，遇到大麻烦了，看能不能在这获得有价值的信息。 1. 化合物描述：一个小分子的pyrrolinzine和一个氨基酸结合，分子量250，最大吸收在220nm，推测有四个异构体（小量分析图谱可看到有三四个峰）； 2.性质描述：对酸不稳定，易分解； 3. 尝试过的条件：用C18柱(Prodigy, Luna, from Phenomenex Company),流动相用的是乙氰/水，梯度洗脱，45分钟内ACN从2%到8%。在这种情况下，偶尔可得到好的图谱，看到有3/4个不同于原料的峰，重复性差。但如果加大上样量，整个图谱变得稀奇古怪，峰强并不随上样量增加而升高，每个峰都变宽，强度没有升多少，本来几个峰retention time就差不多，这样根本峰不开了。 4.试过缓冲剂体系，乙酸铵不行，溶剂在220吸收，这样连个好的基线都得不到；50 mM磷酸盐体系也试过，重复性差；没试过甲酸铵体系，不知他的cut-off波长多少；pH值当然都是在中性偏碱。 希望大家能多给建议。 |
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slightshiner(金币+1):thanks for your suggestion 2010-07-12 10:24:37
slightshiner(金币+1):估计C4更够呛。甲醇和我的化合物反应。不稳定可能是由于有机相梯度变化太小。 2010-07-12 10:26:37
slightshiner(金币+1):氨有可能与原料反应，会使图谱更复杂。 2010-07-12 10:27:56
slightshiner(金币+1):换了一些，比如ACE C18-AR,beckman的，但柱的种类太多了，试也试不完，所以来求经验。 2010-07-12 10:29:41
xiaoxiao7239
木虫 (小有名气)
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- 专业: 植物生理与生化
slightshiner(金币+1):化合物是我自己合成的，现在需要分离。酸性条件下我的化合物不稳定。我们用的WATERSHPLC，三部，全是。醋酸铵的CUTOFF波长太长，不适合我化合物的分离。我的只能在220检测。 2010-07-12 11:28:07
slightshiner(金币+1):什么活性剂呢？通常都用什么活性剂，用量多少呢？ 2010-07-14 10:50:34