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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】HPLC分离求助
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slightshiner

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】HPLC分离求助 已有6人参与

本人正在分离几个氨基酸衍生物，遇到大麻烦了，看能不能在这获得有价值的信息。
1. 化合物描述：一个小分子的pyrrolinzine和一个氨基酸结合，分子量250，最大吸收在220nm，推测有四个异构体（小量分析图谱可看到有三四个峰）；
2.性质描述：对酸不稳定，易分解；
3. 尝试过的条件：用C18柱(Prodigy, Luna, from Phenomenex Company),流动相用的是乙氰/水，梯度洗脱，45分钟内ACN从2%到8%。在这种情况下，偶尔可得到好的图谱，看到有3/4个不同于原料的峰，重复性差。但如果加大上样量，整个图谱变得稀奇古怪，峰强并不随上样量增加而升高，每个峰都变宽，强度没有升多少，本来几个峰retention time就差不多，这样根本峰不开了。
4.试过缓冲剂体系，乙酸铵不行，溶剂在220吸收，这样连个好的基线都得不到；50 mM磷酸盐体系也试过，重复性差；没试过甲酸铵体系，不知他的cut-off波长多少；pH值当然都是在中性偏碱。

希望大家能多给建议。
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1楼 2010-07-11 22:22:31
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hyw166_07

slightshiner(金币+1):thanks for your suggestion 2010-07-12 10:24:37
引用回帖:
Originally posted by slightshiner at 2010-07-11 22:22:31:
本人正在分离几个氨基酸衍生物，遇到大麻烦了，看能不能在这获得有价值的信息。
1. 化合物描述：一个小分子的pyrrolinzine和一个氨基酸结合，分子量250，最大吸收在220nm，推测有四个异构体（小量分析图谱可看到 ...

建议朋友，可以到分析 测试百科网去问问，友情帮顶。。
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2楼2010-07-11 22:31:04
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zhsteel

金虫 (小有名气)
slightshiner(金币+1):估计C4更够呛。甲醇和我的化合物反应。不稳定可能是由于有机相梯度变化太小。 2010-07-12 10:26:37
换C4柱子怎么样:  或者换甲醇? 不知道楼主的图谱为什么不稳定.  没有稳定的数据该如何调整呢?
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只要方便虫子们就好，怎么帮助是次要的吧
3楼2010-07-12 05:43:59
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80年后

金虫 (正式写手)
slightshiner(金币+1):氨有可能与原料反应，会使图谱更复杂。 2010-07-12 10:27:56
乙酸胺是偏中性的 甲酸胺缓冲盐都是偏酸的 用过氨水溶液吗
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4楼2010-07-12 06:34:14
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3sh3rx3q_lz

铜虫 (小有名气)
slightshiner(金币+1):换了一些，比如ACE C18-AR,beckman的，但柱的种类太多了，试也试不完，所以来求经验。 2010-07-12 10:29:41
换个厂家的C18试试，或查下你用的这个柱子硅胶上未反应的硅羟基如何封尾的
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5楼2010-07-12 08:02:51
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xiaoxiao7239

木虫 (小有名气)
slightshiner(金币+1):化合物是我自己合成的，现在需要分离。酸性条件下我的化合物不稳定。我们用的WATERSHPLC，三部，全是。醋酸铵的CUTOFF波长太长，不适合我化合物的分离。我的只能在220检测。 2010-07-12 11:28:07
引用回帖:
Originally posted by slightshiner at 2010-07-11 22:22:31:
本人正在分离几个氨基酸衍生物，遇到大麻烦了，看能不能在这获得有价值的信息。
1. 化合物描述：一个小分子的pyrrolinzine和一个氨基酸结合，分子量250，最大吸收在220nm，推测有四个异构体（小量分析图谱可看到 ...

不晓得楼主是自己进行衍生化操作后上HPLC呢，还是检测别人衍生化以后的样品呢？ 还有就是菲罗门的C18柱子是可以分开氨基酸衍生物的，用的是醋酸铵缓冲体系，pH值要调到6左右，另外切忌缓冲盐浓度不要过高，否则会堵，安捷伦的hplc系统还好，要是waters的系统就一定要注意缓冲盐的浓度。
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6楼2010-07-12 09:08:00
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zhanggaime

银虫 (初入文坛)
slightshiner(金币+1):什么活性剂呢？通常都用什么活性剂，用量多少呢？ 2010-07-14 10:50:34
在流动相中加一些表面活性剂，改变一下分离的效果
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7楼2010-07-13 13:09:15
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