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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】[求助]考马斯亮蓝法测定蛋白质的问题
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pear8787

[交流] 【求助/交流】[求助]考马斯亮蓝法测定蛋白质的问题 已有3人参与

我要测定从菜籽饼粕中提取的菜籽蛋白的含量，因为实验量比较大用凯氏定氮法测定太费时，所以想试试考马斯亮蓝法，所以我想请教大家：
1  如果蛋白质含量在50%左右，那应该如何配置牛血清清蛋白的标准系列而保证我的样品在标准的线性范围之内？
2  我的待测样品是粉末状，应该怎么样测定？
3  操作方法上有写到，每加完一管试剂之后都需要在旋涡混合器上混合，这一步是必须的吗？可否省略？
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1楼 2010-07-03 11:52:04
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-03 14:15:03
1.不是配制标准液的问题了，而是要稀释你样品的问题了
2.拿定量提取液提取，测定提取液中蛋白质浓度，换算成原始样品中蛋白含量
这样只能测定可溶性蛋白，不能代表原始材料的整体蛋白含量
对于非水相的样品，在不能确定所有蛋白都能溶解的情况下，最好还是用凯氏定氮
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2楼2010-07-03 12:04:33
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-03 20:26:44
同意楼上的，自身蛋白含量高应该考虑对样品的稀释
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3楼2010-07-03 12:11:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-03 20:26:54
考马斯亮蓝染色在我的实验里线性范围只有0.5，而且本底吸光度很高，所以我还是用BCA，正在做BCA的曲线
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2010-07-03 16:11:34
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