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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】有没有做动物细胞培养的朋友进来给给建议
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chuchengliang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有没有做动物细胞培养的朋友进来给给建议 已有5人参与

CHO细胞培养的过程中出现的问题：
单克隆筛选出来的细胞，经过一段时间的摇瓶培养稳定后逐渐转到另一种培养基，

待原培养基几乎被替代后，调整细胞密度，培养到对数期，分成两份，一部分作生长曲线，另一部分作为备份
通过生长曲线反映出细胞的活力和密度都非常高

作为备份的细胞培养到对数期后重复上述操作，一部分备份，另一部分作生长曲线，结果发现，细胞的分裂减缓，密度达不到原来的高度
同样下面的一批的密度更低，活力维持的时间更短，测定培养基的代谢产物发现，细胞的糖耗降低，乳酸积累较高，pH低。

不知道是什么原因，希望有高人能给出指点，不胜感激。
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1楼 2010-06-28 15:02:22
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chuchengliang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-06-28 19:40:58:
还是应该从细胞状态考虑的，看你的描述是细胞活力不好。

能说具体点吗？细胞的活力还是满好的，能够维持好几天，但就是对数期维持不长，细胞增殖很慢
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6楼2010-06-29 10:14:22
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dannel025

铁杆木虫 (正式写手)
“糖耗降低，乳酸积累较高”，明显说明细胞的代谢发生了变化，乳酸比生成速率对葡萄糖比消耗速率的比值在相同条件下应该是基本不变的。
如果培养基是同一批次的话，从你的描述看不出更多的问题，我的推测是每次传代后的密度可能不同，从而产生了影响。较高或较低的接种密度都有影响细胞生长的实例，我有切身体会。
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10楼2010-06-29 12:31:20
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
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培养基成分要慢慢改变，就像人去不同的环境，总要有个适应的过程。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
2楼2010-06-28 15:04:25
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qsx04152006

木虫 (知名作家)
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可能因素比较多，如：培养基成分、PH等
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3楼2010-06-28 16:07:00
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是应该从细胞状态考虑的，看你的描述是细胞活力不好。
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52187644
4楼2010-06-28 19:40:58
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chuchengliang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-06-28 15:04:25:
培养基成分要慢慢改变，就像人去不同的环境，总要有个适应的过程。

你说的对，我市慢慢改变的，但是现在是在新的培养基中开始能长好的
但是当传代了以后就不行了
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5楼2010-06-29 10:12:05
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chuchengliang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qsx04152006 at 2010-06-28 16:07:00:
可能因素比较多，如：培养基成分、PH等

但是为什么开始又能长好呢？
一批培养基，同样的生长条件，仅仅传代了一次就不行了
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7楼2010-06-29 10:16:00
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by chuchengliang at 2010-06-29 10:14:22:

能说具体点吗？细胞的活力还是满好的，能够维持好几天，但就是对数期维持不长，细胞增殖很慢

至于是哪个试剂导致的出现这种情况还是需要你自己寻找原因的。但是从描述上我只能判断后来培养的细胞增殖慢了。显然就导致了生长曲线中对数期变短。另外耗糖量增加但是酸变多，说明细胞只是“吃没有长个”。你说的活力好只是肉眼判断的，至于细胞内代谢你只能用指标说明，指标的结果现在他的活力并不好。
我建议你可以测下不同密度下接种看是不是还是如此现象？另外培养基一定要保证都是一样的新鲜。有些细胞是比较“挑食”的。
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52187644
8楼2010-06-29 10:46:37
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qsx04152006

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以测一下生产状态较好的时候细胞密度、PH，然后逐渐分梯度来确定合理的传代参数，细胞培养本身涉及的因素很多，需要一个一个条件摸索
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9楼2010-06-29 12:13:01
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