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chuchengliang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有没有做动物细胞培养的朋友进来给给建议 已有5人参与

CHO细胞培养的过程中出现的问题:
单克隆筛选出来的细胞,经过一段时间的摇瓶培养稳定后逐渐转到另一种培养基,

待原培养基几乎被替代后,调整细胞密度,培养到对数期,分成两份,一部分作生长曲线,另一部分作为备份
通过生长曲线反映出细胞的活力和密度都非常高

作为备份的细胞培养到对数期后重复上述操作,一部分备份,另一部分作生长曲线,结果发现,细胞的分裂减缓,密度达不到原来的高度
同样下面的一批的密度更低,活力维持的时间更短,测定培养基的代谢产物发现,细胞的糖耗降低,乳酸积累较高,pH低。

不知道是什么原因,希望有高人能给出指点,不胜感激。
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chuchengliang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-06-28 15:04:25:
培养基成分要慢慢改变,就像人去不同的环境,总要有个适应的过程。

你说的对,我市慢慢改变的,但是现在是在新的培养基中开始能长好的
但是当传代了以后就不行了
5楼2010-06-29 10:12:05
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chuchengliang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-06-28 19:40:58:
还是应该从细胞状态考虑的,看你的描述是细胞活力不好。

能说具体点吗?细胞的活力还是满好的,能够维持好几天,但就是对数期维持不长,细胞增殖很慢
6楼2010-06-29 10:14:22
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chuchengliang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qsx04152006 at 2010-06-28 16:07:00:
可能因素比较多,如:培养基成分、PH等

但是为什么开始又能长好呢?
一批培养基,同样的生长条件,仅仅传代了一次就不行了
7楼2010-06-29 10:16:00
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chuchengliang

银虫 (小有名气)

我现在怀疑是培养基内营养成分太高的原因,因为该细胞开始是从营养成分较低的培养基中转移到该培养基中的,所以开始生长相当旺盛,传代后细胞的生长开始不如第一代
从糖代谢的情况看,细胞耗糖速度降低,乳酸积累,因此是糖代谢出了问题,所以我猜是不是高浓度葡萄糖对细胞生长出现的抑制,(对了,培养基中葡萄糖的含量为10g/L),以前的糖为2g。
12楼2010-06-30 14:59:28
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