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chuchengliang

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】有没有做动物细胞培养的朋友进来给给建议已有5人参与

CHO细胞培养的过程中出现的问题：
单克隆筛选出来的细胞，经过一段时间的摇瓶培养稳定后逐渐转到另一种培养基，

待原培养基几乎被替代后，调整细胞密度，培养到对数期，分成两份，一部分作生长曲线，另一部分作为备份
通过生长曲线反映出细胞的活力和密度都非常高

作为备份的细胞培养到对数期后重复上述操作，一部分备份，另一部分作生长曲线，结果发现，细胞的分裂减缓，密度达不到原来的高度
同样下面的一批的密度更低，活力维持的时间更短，测定培养基的代谢产物发现，细胞的糖耗降低，乳酸积累较高，pH低。

不知道是什么原因，希望有高人能给出指点，不胜感激。

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1楼2010-06-28 15:02:22

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chuchengliang

银虫 (小有名气)

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我现在怀疑是培养基内营养成分太高的原因，因为该细胞开始是从营养成分较低的培养基中转移到该培养基中的，所以开始生长相当旺盛，传代后细胞的生长开始不如第一代
从糖代谢的情况看，细胞耗糖速度降低，乳酸积累，因此是糖代谢出了问题，所以我猜是不是高浓度葡萄糖对细胞生长出现的抑制，（对了，培养基中葡萄糖的含量为10g/L），以前的糖为2g。