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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于pfu酶PCR
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于pfu酶PCR 已有8人参与

想请教下，我之前是用Taq酶扩增的一个基因的cDNA片段，大小为1800bp，可换成天跟的Taq-plus酶后就扩不出来了，这种酶是具有高保真性的酶，又可以直接连T载体的；我用的是500U的，体系25ul，酶量是0.5ul，延伸是90秒，
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1楼 2010-06-20 15:07:55
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这个等于是换了酶，要重新优化体系和条件
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2楼2010-06-20 16:02:07
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-20 16:02:07:
你这个等于是换了酶，要重新优化体系和条件

谢谢
我再摸索下条件
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3楼2010-06-20 17:33:12
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yuyixst

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PFU和普通taq的混合需要优化buffer
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4楼2010-06-20 17:38:03
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PFU酶相对于Taq来说，扩增长片段保真度是好一些，但是也不一定，我之前用Taq能做出来的用PFU也做不出来，后来用TAKARA的Extaq效果要好一些，那个酶的保真性比较好
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5楼2010-06-21 16:35:42
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wwairsupply

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没用过天根的PFU,不过我们实验室的PFU貌似一分钟扩增500bp多点,应该到不了1K.
保真性的话KOD≈PFU>EXtaq,扩cDNA的话最好还是用高保真的~KOD也不错,而且扩增的也比较快,跟普通Taq差不多
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6楼2010-06-21 16:55:45
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可可猫

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用过TAKARA的prime star  效果还行
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7楼2010-06-21 21:21:36
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延伸时间可以延长些，，
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8楼2010-06-22 16:39:11
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延伸时间不够，退火温度最好做个梯度
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9楼2010-06-22 18:26:05
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