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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 【求助/交流】转基因表达载体构建
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转基因表达载体构建 已有4人参与

最近想将拟南芥的一个基因转入烟草中，请问哪位高手知道构建基因表达载体有什么要求吗？它与超表达载体有什么区别？我想用pCambia1301来做，可它的MCS在启动子后面，不知怎么插入片段
还望高手指教
谢谢！
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1楼 2010-06-19 16:57:54
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pan琳lin

木虫 (职业作家)

小木虫水军秘书长

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:这个以前看过，貌似是载体的要求什么的~~ 2010-06-19 18:21:39
①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。

  ②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。

  ③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。

  ④容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。

  ⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。
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cptbtptp,bcptdtptp (吃葡萄不吐葡萄皮，不吃葡萄倒吐葡萄皮）
3楼2010-06-19 17:32:44
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
过表达载体是表达载体的一种

MCS就是要在promoter后面啊，这样才能把外源基因置于特定启动子的控制之下，实现组成型高表达
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2楼2010-06-19 17:28:07
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
谢谢你们的回复
可能没说准确，我说的那个MCS是在启动子的5‘端后面，载体图如下

我看了别人的文章，很多都是重新再另加入一个启动子来构建表达载体，
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4楼2010-06-20 14:43:22
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你这个只是一个基础载体，在MCS的上下游没有启动子也不存在终止子，所以这个载体不能用来做超表达，你需要根据你的要求引入。
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5楼2011-05-24 16:27:18
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