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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】电泳跑出老来的带为什么有重影
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hunter3401

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】电泳跑出老来的带为什么有重影 已有9人参与

我做的是16sDNA进行菌种鉴定，PCR的结果进行电泳，结果都有重影，连MARKER都有，跳过焦距没用，这是怎么回事啊？（见图）
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1楼 2010-06-14 16:29:28
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
调焦距没用？那中途停过没有？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2010-06-14 17:52:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有点像条带曝空，就是说紫外的能量太强，很快淬灭了EB的荧光
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3楼2010-06-14 21:35:29
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hunter3401

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hunter3401 at 2010-06-14 16:29:28:
我做的是16sDNA进行菌种鉴定，PCR的结果进行电泳，结果都有重影，连MARKER都有，跳过焦距没用，这是怎么回事啊？（见图）

应该没有停过！1%的琼脂糖，120V跑了15min.
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4楼2010-06-14 23:32:01
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hunter3401

新虫 (小有名气)
reasonspare:应从电泳缓冲液，制胶缓冲液入手分析问题。注意胶不要太厚。否则有重影 2010-06-15 07:42:21
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-14 21:35:29:
有点像条带曝空，就是说紫外的能量太强，很快淬灭了EB的荧光

如果说紫外能量太强产生淬灭，该如何处理？
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5楼2010-06-14 23:34:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-15 08:52:47
缩短曝光时间，上样不要上太多
虽然曝空只是一个可能性，但是其他因素要考虑，buffer之类的先都换新的吧
曝空我只试过一次就是因为曝太久了，而且用高能紫外的那个波长曝的
胶厚度倒还不是太严重，做胶回收的时候我都灌得很厚，没出现过
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6楼2010-06-15 08:24:26
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gfxmu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
猜测是胶在垂直方向上有浓度变化，最好把琼脂糖溶解彻底
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7楼2010-06-15 18:35:37
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
8楼2010-06-15 18:58:14
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢经验交流，节日快乐。 2010-06-16 15:47:25
你电泳是直接将EB加入凝胶还是电泳后浸泡的？如果是浸泡的话可能是浸泡时间不够长，导致凝胶中间没有EB，从而产生两条带，我以前就出现过这种情况。
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9楼2010-06-16 15:45:47
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yushenye

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流，节日快乐。 2010-06-16 16:06:55
上样量太少，梳子太厚。
建议：增大上样量，同时换个薄点的梳子试试。
赞一下(2人) 回复此楼
Intheway,Onmyway
10楼2010-06-16 16:02:04
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