应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于基因敲除
52/1返回列表
查看: 3693  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于基因敲除 已有5人参与

最近在做大肠基因敲除，转化的是PCR产物，是DNA片段，2000Kb多点，转化后，平板上有菌落长出来，接摇瓶转化子也长，同样的抗生素浓度下转化前的菌株不长，这可以说明转化子表现抗性吧？但是验证PCR时，P出来的条带总是在一条线上，也就是说没有重组上，感觉很奇怪，不知道各位有没有遇到这种情况，这到底是什么原因，转化进去片段应该不会表达的吧？不知道我有没有把问题说清楚，请高手指教！！先谢过了！！
回复此楼

» 猜你喜欢
上班族，学习ing……
1楼 2010-06-10 09:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 寂寞之巅 at 2010-10-21 15:24:00:

我是说你在做转化的时候 有没有用DPN1 处理pcr产物 ？有可能里面有质粒，导致平皿上有假阳性克隆。

DpnI 是一种酶，作用于甲基化位点  去除质粒模板
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dhmdddd
好好学习，天天向上
17楼2010-10-24 10:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
也遇到同样的问题啊，做酵母基因敲除，转进了抗性基因，能耐受很高的抗生素浓度，PCR验证却做不出来。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-06-10 10:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)
dhmdddd(金币+1):谢谢！酶切试试看！ 2010-06-10 12:03:59
做酶切验证，那是最准确的方法。另外，你PCR时应该做阳性对照，以验证是否是PCR的问题
赞一下 回复此楼
3楼2010-06-10 10:05:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-06-10 10:05:44:
做酶切验证，那是最准确的方法。另外，你PCR时应该做阳性对照，以验证是否是PCR的问题

PCR我做了一个未转化菌株的对照，P出来的条带和转化子P出的条带在在一条带上，我点样时加了一个Marker，结果是全部都没有到2000K，这个应该可以说明PCR没有问题的吧？
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
4楼2010-06-10 12:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭