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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教大家关于dna提取的问题
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新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教大家关于dna提取的问题 已有12人参与

我提的是植物基因组dna，用过ctab法和试剂盒，但效果都不理想，具体问题是
提取出的dna用1倍TE溶解后，会出现絮状沉淀，可以确定不是dna，因为放置两三天后还是有，dna经紫外分光光度计检测正常，但琼脂糖检测结果很不好，有拖尾。

我想请教大家这是什么原因，是dna降解还是有糖酚类杂质？如果是杂质该怎么去除？（我用的ctab法抽提两遍）

附上dna琼脂糖图片

都是用试剂盒提的





[ Last edited by 换换 on 2010-6-8 at 17:43 ]
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1楼 2010-06-08 16:10:27
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换换

新虫 (初入文坛)
自己顶一下吧
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2楼2010-06-08 16:12:11
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-09 06:22:57
１.从带型上来看，你所提取的DNA都有降解的嫌疑；
不知道你的上样量是多少，最好再少取一些稀释之后在点样看看，如果只有一条主带那就是没有降解的（蚕豆那个样品应该是不会有问题的）；
２.下面一块胶的样品不知道是否去ＲＮＡ了，如果没有那就应该是降解了。
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3楼2010-06-08 16:20:25
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zouting

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:23:19
我也用CTAB法提的，提的蚕豆根的，为的是说明凋亡，但是没跑出梯状条带，可是也没有拖尾什么的。当时做的时候是用PCI一次，CI总共三次
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4楼2010-06-08 16:21:57
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maize405

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不到图片啊。
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No pains, no gains.
5楼2010-06-08 16:31:19
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crydevil

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
怀疑是操作剧烈 DNA断了，而且杂质也多了
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6楼2010-06-08 16:33:13
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zhangjh069975

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DNA不纯，有RNA和蛋白污染
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心若在，梦就在！
7楼2010-06-08 16:34:18
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知秋

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不到图,其实没关系的,看你后面要做什么了,很多实验对DNA质量要求不是很高的阿
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8楼2010-06-08 17:07:02
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换换

新虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:17
引用回帖:
Originally posted by dfl204 at 2010-06-08 16:20:25:
１.从带型上来看，你所提取的DNA都有降解的嫌疑；
不知道你的上样量是多少，最好再少取一些稀释之后在点样看看，如果只有一条主带那就是没有降解的（蚕豆那个样品应该是不会有问题的）；
２.下面一块胶的样品不 ...

先谢谢大虾~~

1 有降解的话，那能做AFLP吗？比如第一张图，我操作还算严格啊，样品放-80度，加缓冲液前用液氮处理，从脱离冰箱到加入液氮时间很短，不超过2分钟。
但是有可能样品在送来实验室之前冻融过，不过也就一二次。

2我上样量4μl，dna2μl，蚕豆那个事对照，我做的不是蚕豆

3都是用试剂盒提的，跟用ctab法效果差不多

[ Last edited by 换换 on 2010-6-8 at 17:35 ]
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zhangyonghu
9楼2010-06-08 17:30:06
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 知秋 at 2010-06-08 17:07:02:
看不到图,其实没关系的,看你后面要做什么了,很多实验对DNA质量要求不是很高的阿

呵呵，我做AFLP，貌似要求比较高。。。。。。

但是我同学用我的降解的dna做出来了，而且条带也比较清晰
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zhangyonghu
10楼2010-06-08 17:33:14
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